黑牛肝菌(Boletus aereus)学名枣铜色牛肝菌,属层菌纲,伞菌目,牛肝菌科,牛肝菌属,是一种味道鲜美,营养丰富的野生食用菌,主要分布在我国云南、四川、贵州等地。研究表明黑牛肝菌具有广泛而良好的生物活性作用,主要包括抗氧化,保护修复酒精性肝损伤,降血脂等。本研究拟从下面三个方面探讨黑牛肝菌多糖对小鼠免疫活性作用的影响。1、黑牛肝菌多糖的分离纯化及组分结构分析。本试验选取黑牛肝菌子实体为原料,采用热水浸提法提取黑牛肝菌多糖,得到黑牛肝菌粗多糖(CBAP),经Sevage法除蛋白、透析、冻干得到黑牛肝菌精多糖(RBAP),再经DEAE-Cellulose52离子交换柱层析和Sepharose 4B凝胶柱层析分别进行纯化,得到两个组分,分别为黑牛肝菌中性纯多糖PPBAP Ⅰ和黑牛肝菌酸性纯多糖PBAPⅡ。用紫外光谱扫描,红外光谱扫描及高效液相分析其组分结构。结果显示:黑牛肝菌纯多糖PPBAP Ⅰ和PPBAPⅡ的纯度分别达到90.10±0.99%,90.01±0.87%;紫外扫描表明PPBAP Ⅰ和PPBAPⅡ均不含核酸、蛋白质;红外光谱扫描PPBAP Ⅰ和PPBAPⅡ显示,多糖分子中具有呋喃环、吡喃环碳骨架等典型的多糖特征基团;HPLC分析表明黑牛肝菌多糖是由葡萄糖、果糖、木糖和少量鼠李糖聚合而成的杂多糖。2、以RBAP为试验材料,建立环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠模型,测定免疫相关指标。小鼠被随机分为正常对照组、模型组、RBAP各剂量组和阳性对照组。测定脾脏和胸腺指数来考察免疫器官变化;碳粒廓清实验考察小鼠非特异性免疫功能;Elisa法测定小鼠血清中细胞因子IL-2、IFN-γ的含量以检测小鼠细胞免疫功能。结果显示:与模型组相比,RBAP能显著提高免疫抑制小鼠的脾脏和胸腺指数、碳粒廓清指数以及小鼠血清中细胞因子IL-2和IFN-γ含量(P<0.05或P<0.01)。这表明RBAP对免疫抑制小鼠的免疫功能有一定的增强作用。3、以RBAP为试验材料,通过皮下注射S-180肉瘤细胞建立荷瘤小鼠模型,进行功能性试验。小鼠被随机分为正常对照组、模型组、阳性药物组和RBAP各剂量组。RBAP对荷瘤小鼠免疫功能的影响通过测定小鼠肉瘤大小、免疫器官指数、血清中细胞因子IL-2、TNF-α的含量这几个方面来衡量。结果显示:RBAP能抑制荷瘤小鼠的肉瘤增殖,可以显著提高荷瘤小鼠的脾脏和胸腺指数以及血清中细胞因子IL-2、TNF-α的含量(P<0.05或P<0.01)。这表明RBAP对S-180荷瘤小鼠的免疫功能有一定的增强作用,并可能通过免疫调节来抑制肿瘤增殖。