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柠檬烯是一种重要的单环单萜烯,广泛存在于柑橘、蔬菜等植物中,尤其在柑橘类水果的精油中含量较多,如在甜橙果皮精油中其含量高达90%95%。研究表明柠檬烯具有抗菌、抗氧化、抗癌、止咳平喘和抗炎等生理功能,但由于柠檬烯易被氧化和挥发,且难溶于水,较难保存和使用,因此限制了其在食品、药品、保健品中进一步的应用和推广。脂质体作为一种新型微囊载体,具有亲水亲油性,可提高芯材物质的稳定性和生物利用度,应用十分广泛。本文通过预实验筛选并确定乙醇注入法为柠檬烯脂质体的制备方法,通过单因素和Box-Behnken响应面试验,以包封率为主要评价指标,优化柠檬烯脂质体的配方及制备工艺,并确定了柠檬烯脂质体的最佳制备条件。研究了最优条件下制备的柠檬烯脂质体的多项理化指标:包封率、平均粒径、多分散指数、Zeta电位、形态等,探讨了温度、光照、pH值、氧化还原剂等对柠檬烯贮藏稳定性的影响。通过体外释放及模拟胃肠液考察了柠檬烯脂质体在体外胃肠液中的稳定性及释放规律,主要研究结果如下:1.利用气相色谱法测定柠檬烯的含量,并建立柠檬烯含量与峰面积之间的线性关系。确定气相色谱测定柠檬烯的各项指标为:起始温度40?℃,停留1?min,以15?℃/min升至160?℃,停留1?min,进样口温度为250?℃;流速为1.2?mL/min,不分流,进样量为0.1?μL;用外标法自动进样器直接进样。绘制柠檬烯标准曲线为Y=46000X+74860,R2=0.9990,线性相关性良好。2.选用乙醇注入法制备柠檬烯脂质体,分别考察制备工艺中的主要影响因素:卵磷脂添加量、柠檬烯添加量、胆固醇添加量、PBS的温度、pH值以及磁力搅拌器的转速等对脂质体包封率的影响。在单因素试验基础上,选取胆固醇添加量、柠檬烯添加量、磷酸盐缓冲溶液的温度为影响因素,以包封率为响应值,根据Box-Behnken试验设计原理,采用3因素3水平的响应面分析法优化柠檬烯脂质体的制备工艺,得到柠檬烯脂质体的最佳制备工艺条件为:胆固醇的添加量8.8?mg、柠檬烯添加量12.7 mg、PBS温度51?℃,在此条件下柠檬烯纳米脂质体的包封率为(67.44±0.58)%,与模型预测值相对误差为0.4%,重现性良好。对工艺优化后所制备的柠檬烯脂质体进行理化指标分析,其各项理化指标分别为:包封率(67.44±0.58)%,平均粒径(165.4±2.08)nm,PDI为0.185±0.011,Zeta电位(-16.23±0.569)mV。透射电镜观察工艺优化后的柠檬烯脂质体多数呈球形、椭球形,少数呈不规则形状,无明显粘连和聚结现象,整体上表明脂质体对柠檬烯有较好的包埋效果。3.选用透析袋法,以柠檬烯溶液为对照组,考察了柠檬烯脂质体的体外释放性质,并绘制体外释放曲线,结果表明:柠檬烯溶液能够较迅速的扩散至溶出介质中,在较短时间内达到平衡;而柠檬烯脂质体的释放速率较为缓慢,24 h时柠檬烯的累积释放率为(42.92±1.78)%。通过对数据进行拟合,可知柠檬烯脂质体的体外释放符合一级动力学模型,其拟合方程为Mt=45.64(1-e-0.183t),R2=0.9868,方程拟合度良好,表明柠檬烯具有一定的缓释性。4.通过人工模拟胃肠液环境,考察柠檬烯脂质体在模拟胃肠液中的消化作用,结果表明:柠檬烯脂质体在模拟胃液中相对较稳定,01 h内,柠檬烯的释放速率较快,而后释放减缓,柠檬烯在3 h内的累积释放率为(11.78±1.15)%,表明柠檬烯脂质体可以在胃液中较稳定的存在。而在模拟肠液中,柠檬烯脂质体粒径增加幅度更大,消化率较快,在试验终点3 h时,其释放率达到(36.08±0.74)%,在释放过程中均未产生突释现象。5.评价柠檬烯脂质体的稳定性。分别研究在一定的贮藏时间内,温度、光照、pH值、氧化还原剂对柠檬烯脂质体的物理以及化学稳定性的影响,检测柠檬烯脂质体在贮藏期间各项理化指标的变化。结果表明,温度与光照均会对柠檬烯脂质体产生一定的影响,但温度的影响远要大于光照。通过实验得出脂质体在(4±2)℃条件下,避光保存,稳定性较好,各项指标较稳定。考察pH值与氧化还原剂对其影响时发现,与pH为5.5和6.5相比,脂质体在pH为7.5的条件下具有更好稳定性。当添加0.5%的氧化剂时,与对照组相比,柠檬烯脂质体的粒径和包封率变化幅度较大,表明还原剂对柠檬烯脂质体具有一定的保护作用。