八种中草药中抗肿瘤活性物质体外筛选及其机制初探

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本实验进行了抗肿瘤活性物质体外筛选及其作用机制的研究。首先用MMT法对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术等8种中草药作用于癌细胞进行筛选。结果表明,浓度为1.0-1.5mg/ml的甘草乙醇浸提液(ESCG)、莪术乙醇浸提液(ESCC)和柴胡乙醇浸提液(ESCB)对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721和肺癌细胞SPC-A1有较强的抑制增殖作用。在一定范围内,抑制作用随着浓度的加大而加强,并且随着时间的延长,细胞成活率呈现下降趋势。在浓度1.0-1.5mg/ml时,6-12小时是ESCB和ESCG对肿瘤细胞的最佳抑制时间,而ESCC最佳作用时间则是在12-24小时。曲线抑制率的计算还表明:活性物质对肿瘤细胞的作用,更大地依赖于活性物质本身,而不是肿瘤细胞株。 将1.5mg/ml ESCG、ESCC和ESCB分别作用于癌细胞,光镜下72小时内可见具“凋亡”形态的细胞:胞质浓缩,膜起小泡,出现凋亡小体,膜仍具完整性。用Hoechst33342及PI荧光染料对活性物质作用下的细胞进行联合染色,可以看到,不仅有发出红色荧光的坏死细胞和发出蓝色荧光的正常细胞,还有发出草蓝色荧光的凋亡细胞。提取细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳,出现明显的“DNA ladder”,表明一定浓度的ESCG、ESCC和ESCB在体外能诱导肺癌细胞SPC-A1和肝癌细胞SMMC-7721凋亡。凋亡曲线证明了肿瘤细胞的凋亡率随着活性物质浓度的增大而增大。以上结果表明,在体外ESCG、ESCC和ESCB对肝癌细胞SMMC-7721和肺癌细胞SPC-A1具有显著的抗增殖作用,它们能够诱导癌细胞的凋亡。
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