【摘 要】
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目的:β1,3半乳糖基转移酶7[β3GalT7(GnT8)]是我室通过电子克隆得到的一个新型的人类糖基转移酶。人共刺激分子4IgB7-H3为Ⅰ型跨膜糖蛋白,使用软件预测发现其氨基酸序列上有
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目的:β1,3半乳糖基转移酶7[β3GalT7(GnT8)]是我室通过电子克隆得到的一个新型的人类糖基转移酶。人共刺激分子4IgB7-H3为Ⅰ型跨膜糖蛋白,使用软件预测发现其氨基酸序列上有相当数量的糖基化位点。本文期望通过对4IgB7-H3与β3GalT7(GnT8)的相互关系进行研究,探索β3GalT7(GnT8)对B7-H3蛋白的翻译后修饰作用。方法:构建β3GalT7(GnT8)基因反义表达细胞,RT-PCR和Western blot研究其基因下调对人4IgB7-H3分子表达的影响;构建4IgB7-H3基因转染细胞,RT-PCR和Western blot研究其基因上调对人β3GalT7(GnT8)分子表达的影响;多种在线糖基转移酶作用位点预测软件联用,预测人4IgB7-H3氨基酸序列上潜在的糖基转移酶作用位点,免疫共沉淀研究两种蛋白质之间的相互作用,细胞免疫荧光化学术检测两种蛋白质在细胞内的共定位。结果:获得了β3GalT7(GnT8)基因反义表达稳定细胞株与高表达4IgB7-H3基因转染稳定细胞株;β3GalT7(GnT8)基因表达下调使4IgB7-H3基因表达受到一定程度的抑制;β3GalT7(GnT8)基因表达随着4IgB7-H3基因表达上调略有上升;软件预测4IgB7-H3氨基酸序列上潜在的O-GalNAc糖基化位点有3个,N-糖基化位点有8个,O-β-GlcNAc的附着位置有18个;β3GalT7(GnT8)蛋白与4IgB7-H3蛋白能共沉淀,并且两者能在细胞内共定位。结论:在mRNA和蛋白表达水平,β3GalT7(GnT8)和4IgB7-H3的表达呈正相关;β3GalT7(GnT8)蛋白和4IgB7-H3蛋白在氨基酸序列上和空间上具有相互作用的可能性;β3GalT7(GnT8)蛋白可能对4IgB7-H3蛋白有糖基化修饰作用。
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