论文部分内容阅读
癌症是人类患病死亡最主要的原因之一。目前已有的临床抗癌药物大多存在多药耐药性和较明显的副作用（例如心脏毒性、腹泻和中性粒细胞减少）等缺陷,因此,亟需开发新型抗肿瘤药物以克服目前临床抗肿瘤药物存在的缺陷。本论文针对NF-?B和凋亡这两个与癌症的发生与发展密切相关的因子开展新型抗癌药物先导化合物的发现与作用机制研究。近年来,大量研究证明,抑制NF-?B通路的激活可以抑制肿瘤细胞的增殖。为了得到具有抑制NF-?B活性和抗增殖活性的新型抗癌药物先导化合物,课题一中设计并合成了25个新型的孕烯醇酮/2-氰基丙烯酸酯的共轭物（6–30）。在荧光素酶检测中,化合物22和27–30对TNF-?诱导的NF-?B的激活表现出抑制作用。其中,化合物30对TNF-?诱导的NF-?B激活抑制活性最强(IC50=2.5?M),该活性也通过western blot实验得到进一步证实。此外,该化合物对于MCF-7、A549、H157、HL-60细胞系也表现出潜在的增殖抑制活性(IC50=6.5–36.2?M)。该部分研究内容表明,部分孕烯醇酮/2-氰基丙烯酸酯共轭物可兼有抑制NF-?B激活的活性和抗肿瘤增殖活性,这一发现为新型抗癌药物的研发提供了新的分子骨架。基于上述研究内容的启发,课题二中设计并制备了一系列新型香豆素/2-氰基丙烯酸酯杂合的化合物（5a–5u、6a和6b）,并对其体外抗癌活性进行了评价。其中,化合物5p和5q两个类似物对癌细胞系（A549、H157、HepG2、MCF-7、MG63和U2OS）表现出广谱的抗肿瘤活性,特别是化合物5q对MG63细胞的抗增殖活性最显著,其IC50值为5.06?0.25?M。通过形态学观察、DAPI染色、电镜实验表明,经化合物5q处理过的MG63细胞表现出明显的凋亡特征。此外,通过流式细胞仪检测磷脂酰丝氨酸外化发现,化合物5q是以剂量依赖的方式诱导MG63细胞凋亡。继而我们通过PT-PCR和western blot实验进一步证实了5q对诱导MG63细胞凋亡具有较强的作用。研究结果显示,MG63细胞凋亡与化合物5q诱导抗凋亡蛋白bcl-2的下调、促凋亡蛋白bax的上调和诱导casepase-3,8和9的激活有关。本部分研究结果表明,香豆素/2-氰基丙烯酸酯杂合的化合物可诱导肿瘤细胞凋亡并具有较强的体外抗肿瘤活性,为抗癌药物先导物的研发提供了一种新的分子模式,有必要对该类化合物进行进一步的结构优化、活性评价、作用机制和动物体内药效等初步临床前研究。