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第一部分:基础实验 1实验研究一:猪正常软骨细胞系建立与鉴定 目的:建立猪的正常软骨细胞系,研究其细胞形态和增殖特点。为后续研究药物对软骨细胞增殖、凋亡特点以及药物如何发挥保护软骨作用的具体机制提供技术基础和支撑。 方法:通过鼓楼医院实验中心协助,选购江苏省农科院约克夏猪3头,(雌性,3月大,10kg),采用胰酶、Ⅱ型胶原酶序贯消化法收集原代细胞,倒置显微镜下观察并记录细胞生长变化。采用MTT法绘制细胞增值曲线;通过甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光染色来鉴定细胞种类。 结果:原代细胞经鉴定为猪正常软骨细胞有限细胞系。细胞生长正常,镜下观察生物学性状稳定。 结论:经本次实验验证,采用胰酶、Ⅱ型胶原酶序贯消化法,可成功培养出生物学特征明显的正常软骨细胞有限系。为研究后续研究(O)A细胞的生物学性状及基质代谢积累了实验技术基础。 2实验研究二:褪黑素药液对正常软骨细胞代谢的研究 目的:探讨褪黑素对正常关节软骨细胞代谢作用的研究,讨论褪黑素应用的可靠性和安全性。 方法:取第三代生长期的软骨细胞,将细胞按给药浓度分为:空白组、极小剂量组、小剂量组、中剂量组、大剂量组和极大剂量组。各组细胞培育24h及48h后,通过CCK-8试剂检测细胞增殖大小;各组细胞培育72h、120h后,通过流式细胞仪检测细胞凋亡比例。 结果:褪黑素可明显促进正常软骨细胞增殖,而对细胞凋亡,无明显作用。 结论:褪黑素对正常软骨细胞无不良副作用:可明显促进正常软骨细胞增殖,对其凋亡则作用甚微。 第二部分:临床研究-小切口在全髋置换术中的meta分析 目的:采用Meta分析法对现已发表的关于微创入路和传统入路行全髋置换术治疗骨性关节炎的文献进行综合分析,系统评价微创人工全髋关节置换术(Minimum invasive Totalhip arthroplasty,mini-THA)的安全性及疗效。 方法:计算机检索PubMed、OVID数据库、Cochrane图书馆、Elsevier、Springer、维普数据库、中国期刊全文数据库和万方数据库。检索时间跨度从2010年至2014年;补充手工检索《中华外科杂志》等6种中文主要外科杂志及相关参考文献。收集比较微创人工全髋关节置换术与传统置换术的随机对照试验(RCT),根据改良Jadad评分评价纳入研究的方法学质量,采用RevMan5.0软件进行Meta分析,以比较微创髋关节置换组和常规髋关节置换组在手术切口、手术时间、术中失血量、住院时间、术后Harris、假体位置准确度(包括臼杯前倾角、外展角和假体中立位比率)以及术后并发症的总发生率的差异。 结果:共纳入19篇RCT,包括1708例患者。Meta分析结果显示:微创入路可显著降低术中平均出血量且微创入路切口长度明显短于常规切口。在术后HHS评分方面,微创入路好于常规入路,数值有统计学意义但无临床意义。术后臼杯前倾角方面,常规入路好于微创入路,数值有统计学意义但无临床意义。在手术时间、术后臼杯位置、假体安放位置、术中及术后短期并发症、平均住院时间方面两者无显著统计学差异。 结论:微创入路并不增加手术短期并发症,其短期临床疗效优于传统入路,远期疗效对比有待后续长期随访。