目的肝纤维化是多种慢性肝损伤的修复反应,纤维化是多种慢性肝病共同的病理过程,是肝硬化的早期阶段,其主要临床表现为胁痛、乏力。早期的肝纤维可逆的,失于治疗则会进展为肝硬化甚至肝癌。肝纤维化发生、发展的核心环节是肝星状细胞（HSC）的活化与细胞外基质（ECM）的沉积。肝肝纤维化是全球性的卫生难题,目前临床对该病的治疗多是针对其原发病的病因,如抗病毒、抑制免疫等,缺乏有效的抗纤维化手段。中医药在抗肝纤维化方面具有独到优势,中医药治法在肝纤维化的治疗上扮演了重要角色。四逆散加味方是临床治疗肝纤维化的有效经验方,有临床证据表明该方能够有效改善肝纤维化患者血清学指标。本实验以四逆散加味方为研究对象,验证其对免疫诱导肝纤维化大鼠的治疗效果,研究其对免疫诱导肝纤维化大鼠NOX、PI3K、Akt蛋白表达的影响,阐明其抗肝纤维化的作用机制,为四逆散加味方临床广泛应用提供实验支撑。方法72只雄性SD大鼠适应性饲养1周后,按随机数字表法分为6组:空白组（K）、模型组（M）、四逆散加味方高剂量组（G）、四逆散加味方中剂量组（Z）、四逆散加味方低剂量组（D）、秋水仙素组（Q）,每组12只。除空白组外,其余均采用未灭活猪血清腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,连续8周,第六周即可形成肝纤维化。造模第6周,四逆散高、中、低剂量组,每日分别按生药量15.3、7.65、3.83 g·kg^-1给药,秋水仙对照组每日予悬浊液0.09mg·kg^-1灌胃,模型组、空白组予等量生理盐水灌胃。给药体积均为10ml·kg^-1,连续21天。给药结束后取材,称重比较其肝脏指数变化;生化分析仪分析血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）含量;放射免疫法分析血清透明质酸酶（HA）、层黏连蛋白（LN）、III型前胶原蛋白（PCIII）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）;He染色、Masson染色观察大鼠肝组织病理变化;免疫组化法（S-P）观察NOX4、PI3K、Akt在肝组织的定位表达;蛋白免疫印迹分析（Western blot）NOX4、PI3K、Akt蛋白定量表达。结果1.免疫性肝纤维化的模型评价:与空白组相比,模型组大鼠的肝脏指数明显升高（P<0.01）,模型组大鼠血清ALT、AST均有增加（P<0.01）,模型组大鼠血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C的含量均有升高（P<0.01）;HE染色提示模型组大鼠肝索、肝小叶结构紊乱,中央静脉出现偏离或消失,肝细胞有明显的气球样变性,部分组织呈炎性细胞浸润像,纤维结缔组织增生,部分假小叶形成或坏死,部分肝细胞呈胆汁淤积表现;Masson染色结果提示模型组胶原纤维明显增多,并集中在汇管区,面积明显增大（P<0.01）。2.四逆散加味方对肝纤维化的治疗作用:与模型组大鼠相比,四逆散低、中、高剂量治疗组均能有效降低大鼠血清ALT、AST（P<0.01）;各剂量组均能有效降低血清HA、Ⅳ-C水平,四逆散中、高剂量组能够降低血清PCⅢ的含量（P<0.01）;HE染色结果提示随着四逆散加味方药物浓度的增加,肝小叶结构逐渐得到修复,假小叶的数量有明显的不同程度的减少,肝索排列的整齐度呈不同程度的改善,肝细胞的气球样变性有着不同程度的减轻,偶见少量的炎性细胞浸润,较模型组减轻明显,结缔组织增生也有减轻;Masson染色结果提示四逆散低、中、高剂量组胶原纤维明显减少,差异极显著（P<0.01）。3.NOX4、PI3K、Akt蛋白的表达:Wb结果提示,模型组大鼠肝组织中NOX4、PI3K、Akt蛋白的相对表达量较空白组明显增加（P<0.01）,与模型组相比,四逆散低、中、高治疗组均能有效降低大鼠肝组织中NOX4、PI3K、Akt的相对表达量（P<0.01）;免疫组化结果提示NOX、PI3K、Akt主要在细胞浆中表达,阳性表达呈棕褐色。平均光密度值分析提示:模型组NOX4、PI3K、Akt蛋白表达较空白组有增加（P<0.01）,四逆散中、高剂量组能下调NOX4蛋白在细胞质的表达（P<0.01）,四逆散高剂量组下调PI3K蛋白在肝细胞质中的的表达明显（P<0.01）,四逆散低、中、高剂量组均能减少Akt蛋白在细胞质的表达（P<0.01）。结论1.猪血清腹腔注射能够成功诱导免疫性肝纤维化大鼠模型。2.四逆散加味方能够改善免疫性肝纤维化大鼠的肝功,具有缓解肝损伤、降酶、减少肝脏胶原纤维沉积的作用。3.四逆散加味方发挥保肝、抗炎、抗纤维化的机制之一可能是通过下调大鼠肝组织中NOX4、PI3K、Akt的蛋白表达,阻断NOX-PI3K/Akt信号转导通路,从而抑制HSC的活化,促进HSC凋亡以及减少ECM的沉积。