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目的：肿瘤的本质是细胞周期调节失控，细胞呈自主的、无限制的增殖。p16基因编码的P16蛋白是细胞周期素依赖激酶4(cyclin-dependent kinase，CDK)的抑制因子，在细胞周期调控中起重要作用。p16基因及其表达产物的异常与多种肿瘤的发生发展有关。目前关于p16基因与白血病关系的研究大多集中在白血病细胞系和小儿急性白血病患者，对成人急性白血病患者的研究较少。尚未见到报道对成人急性白血病患者进行p16基因结构和表达水平的系列检测，探讨这部分患者中p16基因失活是否存在转录和翻译调控的异常。本实验对成人急性白血病患者p16基因进行纯合缺失、甲基化及mRNA水平和P16蛋白表达的系列检测，研究p16基因失活与成人急性白血病的相关性、成人急性白血病p16基因失活与其转录和翻译调控的关系，探讨成人急性白血病p16基因失活的机制。 方法：实验组75例成人初治急性白血病患者，包括急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)32例，急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)43例。对照组为20名正常对照者。样本取自骨髓(约2ml)，208／L EDTA抗凝。提取基因组DNA，分别用多重-PCR方法和甲基化敏感性限制性内切酶-PCR技术，检测p16基因第1和第2外显子(exon，E)纯合缺失及异常甲基化；同时分别应用mRNA原位杂交方法和免疫组织化学方法，检测每例样本中p16mRNA和P16蛋白表达的水平。数据用SPSS10.0统计软件处理。 结果：1．p16纯合缺失：实验组75例成人急性白血病患者中，p16基因纯合缺失成人急性白血病P16基因缺失、甲基化及表达异常的研究2例，均为ALL患者，表现为El和EZ同时缺失。43例AML患者和20例对照组样本未发现缺失。2.P16甲基化:在73例未检测出P16基因纯合缺失的实验组样本中，检测出甲基化14例，其中EI甲基化2例，EZ甲基化2例，El和EZ同时甲基化10例。对照组20例样本无一例甲基化。实验组和对照组差异具有显著性(介0.035)。3.PI 6 mRNA水平的检测:未检测出P16基因纯合缺失的73例实验组样本中，P16mRNA原位杂交检测阴性17例，阳性17例，39例强阳性。对照组弱阳性1例，阳性巧例，强阳性4例。4.P16蛋白表达的检测:未检测出P16基因纯合缺失的73例实验组样本中，P16蛋白免疫组化阴性19例，弱阳性3例，阳性18例，33例强阳性。对照组弱阳性2例，阳性巧例，强阳性3例。5.P16基因结构与其表达综合分析: (1)14例pl6基因甲基化的实验组样本中，相应的P16mRNA检测均为阴性。提示pl6基因甲基化可能抑制该基因的转录。(2)在59例未检测到pl6基因纯合缺失和甲基化的实验组样本中，P16mRNA阴性3例，阳性17例，强阳性39例。显示pl6基因结构异常与P16 mRNA表达不平行，推测部分成人急性白血病患者pl6基因存在转录调控的异常。(3)在56例P16mRNA非阴性的实验组样本中(阳性17例、强阳性39例)，相应的P16蛋白表达水平不同(阴性2例，弱阳性3例，阳性18例，强阳性33例)。用配对t检验对每例样本中p16mRNA原位杂交和P16蛋白免疫组化阳性细胞率进行检验，差异具有显著性(t=3 .018，尸=0.004)，显示成人急性白血病患者p16mRNA和P16蛋白表达水平不平行，推测部分成人急性白血病患者pl6基因存在翻译调控的异常。(4)实验组P16蛋白表达非阴性的样本中，P16蛋白以高表达为主;对照组P16蛋白以中等程度的表达为主。经秩和检验，实验组和对照组差异具有显著性(介0.001)，推测P16蛋白高表达可能与成人急性白血病的发生发展有关。 结论: 1.pl6基因第1和/或第2外显子甲基化而非纯合缺失是成人急性白血病中重要的分子事件。 2.成人急性白血病中，P16基因结构、P16mRNA及P16蛋白表达不平行，推测部分成人急性白血病患者pl6异常可能由转录和翻译调控的异常所致。 3.P16蛋白高表达可能与成人急性白血病的发生发展有关。