乙酰甲胺磷在番茄植株内的迁移及果实中的代谢机理研究

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本试验研究了内吸性杀虫剂乙酰甲胺磷在番茄植株体的迁移和果实内代谢机理。建立了番茄中同时检测乙酰甲胺磷对映体及其代谢产物甲胺磷对映体的残留分析方法;通过对番茄植株进行环割试验,研究了乙酰甲胺磷在番茄植株中的迁移途径及代谢规律;通过在果实中加入一定浓度的原花青素,并通过转录组测序,初步探讨乙酰甲胺磷在番茄果实内的代谢机制。对于在农业生产中,农药的高效安全的使用具有理论指导意义,主要结果如下:1.建立了番茄中乙酰甲胺磷对映体及其代谢产物甲胺磷对映体的气相色谱-火焰光度检测器(GC-FPD)检测方法。番茄果实样品中,乙酰甲胺磷对映体在0.025~2.5mg/kg浓度下的添加回收率在83.98%~118.56%之间,相对标准偏差在1.96%~6.01%之间;甲胺磷对映体在0.025~2.5 mg/kg浓度下的添加回收率在81.06%~102.23%,相对标准偏差范围为2.69%~6.54%。番茄植株样品中,乙酰甲胺磷对映体在0.025~2.5 mg/kg浓度下的添加回收率在80.81%~117.73%之间,相对标准偏差在3.01%~10.89%之间;甲胺磷对映体在0.025~2.5 mg/kg浓度下的添加回收率在80.21%~95.19%之间,相对标准偏差在1.66%~7.55%之间。乙酰甲胺磷R-(+)体与S-(-)体的定量限(S/N=10)分别为0.010 mg/kg和0.010mg/kg。甲胺磷R-(+)体与S-(-)体的定量限(S/N=10)分别为0.005 mg/kg和0.006mg/kg。该方法的准确度和精密度都能满足番茄样品中乙酰甲胺磷和甲胺磷的残留分析要求。2.番茄叶柄化学环割处理后明显降低了番茄植株体内乙酰甲胺磷的迁移运输,特别是降低了向下运输的速率,但不能完全阻断乙酰甲胺磷在植物体内向下的运输,表明乙酰甲胺磷从叶片向茎的运输是通过韧皮部和木质部共同完成,韧皮部的运输量比木质部多。环割组与对照组相比,甲胺磷含量无明显差异,说明甲胺磷在叶片与茎之间的运输途径可能主要是通过木质部进行。灌根施药试验中发现乙酰甲胺磷从根部向上运输主要是通过木质部运输,而且番茄植株对乙酰甲胺磷两个对映体吸收转运存在选择性差异,对S-(-)体运输速率大于R-(+)。而代谢物产物甲胺磷含量是环割组低于对照组,而且甲胺磷R-(+)体浓度显著高于S-(-)体浓度,说明乙酰甲胺磷在番茄体内代谢可能存在选择性差异性,其更容易降解为R-(+)甲胺磷。对照组果实中甲胺磷与乙酰甲胺磷的比值比环割组小,说明环割处理降低了番茄植株中乙酰甲胺磷的代谢。3.通过在果实中加入原花青素,来研究原花青素对乙酰甲胺磷在番茄果实中的降解的影响。在纯水中加入原花青素与乙酰甲胺磷,实验结果表明48 h内乙酰甲胺磷水解缓慢,与加原花青素的实验组对比,两者没有明显差别,而且都没有甲胺磷产生。而在番茄果实中,对照组注射乙酰甲胺磷后48 h番茄果实中甲胺磷的含量为0.146mg/kg,而实验组中甲胺磷的含量为0.186 mg/kg,实验组甲胺磷含量明显高于对照组。可见,原花青素促进了番茄果实中乙酰甲胺磷的降解,可能与原花青素消除自由基的功能有关。4.通过转录组测序分析研究乙酰甲胺磷在番茄果实内代谢机制,得到差异基因15个。对这15个差异基因在番茄中主要参与的反应进行查询,结合乙酰甲胺磷与甲胺磷分子结构的差异,得到两个可能参与乙酰甲胺磷降解的基因:GCH1(GTP cyclohydrolase 1),CPA(N-carbamoylputrescine amidase)。
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