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目的:食管癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率分别占我国恶性肿瘤的第5位和第4位,我国食管癌的病理类型以食管鳞状细胞癌为主。由于早期食管癌的症状不明显,一旦确诊后多为中晚期,即使采取以手术、放化疗为主的综合治疗,其远期治疗效果并没有明显改善,近年来针对肿瘤发病的分子学机制采取特异性的靶向治疗成为抗肿瘤研究的热点,Hedgehog(Hh)信号通路在胚胎期调控多种细胞的分化和生长,对维持成熟器官内环境稳定及人类多种恶性肿瘤的发展及转移密切相关。Gli作为Hh信号通路下游调控中心,其异常激活可以启动下游多种肿瘤相关基因的转录。最近研究表明,Gli基因在人类基底细胞癌、乳腺癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中被异常激活并在肿瘤的发生发展及侵袭转移密切相关。PI3K通过磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidvlinositol-3-kinases,PI3K)是细胞内重要信号通路之一,主要通过活化下游的靶蛋白AKT参与细胞的增殖、凋亡、侵袭转移过程。上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)是指上皮型细胞在特定的生理或病理情况下向间质型细胞表型转变的过程,是肿瘤浸润和转移的重要机制之一。有研究发现Hh通路可以通过影响PI3K通路进而影响EMT过程促进肿瘤的侵袭转移,但目前国内外关于食管鳞癌中Gli是否通过PI3K/AKT通路调控EMT过程尚无明确结果,因此本研究主要探讨Gli调节食管鳞癌KYSE-30细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的分子学机制,寻找有效治疗食管鳞癌的分子靶向药物。方法:实时荧光定量PCR法观察GANT61处理KYSE-30细胞24h后对Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherin m RNA表达的影响;Western blot试验观察GANT61处理KYSE-30细胞24h后对Gli1、Gli2、p-AKT、AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表达的影响;Transwell侵袭实验观察GANT61抑制Gli1和Gli2表达后对食管鳞癌细胞迁移侵袭能力的影响;应用N-Shh活化KYSE-30细胞24小时后,对相应Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherinm RNA及相应蛋白及AKT、p-AKT蛋白进行测定,并通过Transwell侵袭实验研究对其侵袭能力的影响,同时还应用GANT61&N-Shh作用KYSE-30细胞24小时,实时荧光定量PCR法观察KYSE-30细胞中Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherin m RNA表达量的变化;Western blot试验观察KYSE-30细胞中Gli1、Gli2、p-AKT、AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表达的变化;Transwell侵袭实验观察GANT61&N-Shh组对食管鳞癌细胞侵袭转移能力的影响。结果:1 Gli抑制剂GANT61组与DMSO对照组相比可以显著下调食管鳞癌KYSE-30细胞的Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherin m RNA表达(P均<0.01);Western blot显示GANT61可以下调KYSE-30的Gli1、Gli2、p-AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表达(P均<0.01),而AKT蛋白表达没有统计学意义(P>0.05);Transwell侵袭实验显示GANT61可以显著抑制KYSE-30细胞的侵袭能力(P<0.01)。2应用Gli激动剂N-Shh组可以显著上调食管鳞癌KYSE-30细胞的Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherin m RNA,m RNA表达(P均<0.01),Western blot显示N-Shh可以上调KYSE-30的Gli1、Gli2、p-AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表达(P均<0.01),而AKT蛋白表达没有统计学意义(P>0.05);Transwell侵袭实验证实N-Shh可以促进肿瘤细胞的侵袭能力(P<0.01)。3 GANT61&N-Shh组与GANT61组相比上调了KYSE-30细胞的Gli1、Gli2、Vimentin和N-cadherin m RNA表达(P均<0.01);Western blot显示同样上调了KYSE-30的Gli1、Gli2、p-AKT、Vimentin和N-cadherin蛋白表达(P均<0.01),而AKT蛋白表达没有统计学意义(P>0.05)。Transwell侵袭实验显示GANT61&N-Shh组与GANT61组相比促进了KYSE-30细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论:在食管鳞状细胞癌中Gli的表达与上皮间质转化过程密切相关,Gli可能通过PI3K/AKT途径促进上皮间质转化过程。Gli1和Gli2表达降低可以通过下调p-AKT蛋白的表达从而抑制了上皮间质转化过程,导致食管鳞状细胞癌的侵袭转移能力降低;N-Shh上调Gli1和Gli2之后,p-AKT呈现高表达,从而促进上皮间质转化过程,增加了细胞的侵袭能力;用GANT61作用食管鳞状细胞后再用N-Shh作用细胞,上皮间质转化及侵袭转移被部分恢复。因此,Gli有望成为抑制食管肿瘤转移的有效新靶点。