目的：本实验通过体外原代培养人牙龈成纤维细胞，在倒置显微镜下观察该细胞形态及生长方式，检测中药骨碎补对牙龈成纤维细胞的增殖活性及细胞总蛋白合成的影响，为今后中药骨碎补用于临床治疗牙龈及牙周疾病提供实验依据。 方法：采用组织块法培养人牙龈成纤维细胞，在倒置相差显微镜及光镜下观察其细胞形态。制备中药骨碎补煎液，用MTT法和考马斯亮蓝染色法分别测定药物作用下细胞的生长曲线及总蛋白合成等基本生物学特性，检测中药骨碎补对体外培养的人牙龈成纤维细胞的增殖活性及细胞总蛋白合成的影响。 1牙龈成纤维细胞的原代培养及生物学特性观察：河北医科大学第四医院口腔科拔除的阻生健康牙齿上，切取少量牙龈组织，将所取的牙龈组织立即放置于含有青霉素100u/ml、100μg/ml链霉素的预冷Hanks液中。采用组织块法培养人牙龈成纤维细胞。取第4代细胞胰酶消化，制成细胞悬液，调整细胞浓度至1×104/ml，接种于96孔培养板。每24h取3孔，吸弃培养液，胰酶消化，制成细胞悬液，计数，取均值。连续观察7d，绘制牙龈成纤维细胞的生长曲线。 2骨碎补煎液的制备：自河北医科大学第四医院中药房购买中药骨碎补，将骨碎补加入水中煎煮，过滤，用含2％FBS的培养液稀释到10，50，100，500，1000μg/ml的终浓度，调pH至7.0～7.1，分装，4℃保存备用。 3细胞增殖效应和细胞总蛋白含量的测定：取第4代细胞胰酶消化，制成细胞悬液，调整细胞浓度至1×104/ml，接种于96孔培养板，每孔100μl，孵育24h后吸弃培养液。分别将浓度不同的中药骨碎补煎液加入到培养2，5，8d的牙龈成纤维细胞液中，MTT法及考马斯亮蓝染色法测定骨碎补作用后的人牙龈成纤维细胞的增殖效应和细胞总蛋白含量。 结果： 1牙龈成纤维细胞形态学观察：牙龈成纤维细胞体外原代培养成功率为100％，倒置显微镜下牙龈成纤维细胞呈长梭形或纺锤形，为单核细胞，有长短不一的细胞突起，细胞核为圆形或卵圆形，大多位于胞浆中央，细胞排列呈束状或漩涡状。HE染色光镜下观察胞质丰满，嗜伊红，胞核嗜碱性。 2人牙龈成纤维细胞的生长曲线：生长曲线略呈“S”形，接种后第1d细胞数略有下降，第2d开始有所回升，但长势缓慢。第3d开始曲线急剧上升，提示细胞生长速度加快，进入对数生长期，这一状态持续至第5d。第6d开始进入平台期，细胞生长速度减缓。 3骨碎补对细胞的增殖效应：10、50、100、500、1000μg/ml范围内各浓度中药骨碎补组的牙龈成纤维细胞生长速度均高于对照组，骨碎补煎液在浓度为100μg/ml时对人牙龈成纤维细胞增殖效果最为显著。随着作用时间的延长，细胞的OD值逐渐增大，在第5天达到最大。不同作用时间组之间具有明显的差异(P＜0.05)，在10、50、100、500、1000μg/ml范围内，骨碎补促增殖作用，显示出一个明显的浓度依赖效应和时间依赖效应。 4骨碎补对人牙龈成纤维细胞总蛋白合成的影响：10、50、100、500、1000μg/ml的骨碎补与对照组比较均明显促进人牙龈成纤维细胞总蛋白合成(P＜0.05)，且骨碎补对人牙龈成纤维细胞总蛋白合成的促进作用显示出明显的浓度依赖效应。 结论： 1牙龈成纤维细胞体外原代培养成功率较高，可为牙龈及牙周病的研究提供大量的种子细胞。 2骨碎补提取液在10、50、100、500、1000μg/ml浓度范围内，细胞接种2～,8天内有促进人牙龈成纤维细胞增殖的作用，其中细胞接种第5天，100μg/ml浓度的骨碎补对人牙龈细胞增殖效果最为显著。 310、50、100、500、1000μg/ml浓度范围内的中药骨碎补对人牙龈细胞总蛋白合成有促进作用。