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背景和目的:SET原癌蛋白是PP2A内源性抑制因子,参与调控DNA复制、组蛋白修饰、核小体组装、基因转录和细胞增殖等多种生物学过程。SET介导的PP2A活性抑制参与了多种恶性肿瘤的发生发展。然而,SET在非小细胞肺癌中的临床和生物学意义尚不明确,本研究旨在探讨SET在非小细胞肺癌发生发展中的作用和机制。方法:1.收集2010年6月-2012年6月在天津市肿瘤医院手术切除的I-IIIA期小细胞肺癌组织248例,癌旁组织155例。采用免疫组化的方法检测SET在肺癌和癌旁组织中的表达情况,分析SET与肺癌患者临床病理特征及预后的关系。2.用western blot的方法检测SET在肺癌细胞系及正常上皮细胞系中的表达差异。选取细胞系:A549、H1975、HCC827、PC9进行后续实验。利用SET siRNA敲低肺癌细胞系中SET蛋白,同时设置阴性对照组。用MTT及平板克隆检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell检测细胞侵袭的能力;划痕实验检测细胞迁移的能力;Western blot方法检测转染后SET的表达情况,同时检测AKT、ERK1/2等表达情况,探讨SET信号通路对肺癌发生发展的影响。3.MTT法检测FTY70、Erlotinib对肺癌细胞系的IC50值,检测药物敏感性。其次,用FTY720单独或者联合Erlotinib处理细胞,同时设置空白对照组。进一步通过MTT、流式细胞术检测细胞增殖及细胞周期的变化,最后用western blot检测药物处理后AKT、ERK1/2等信号通路分子的变化。结果:1.用免疫组化检测248例肺腺癌和肺鳞癌组织中SET表达,发现高表达SET的比例是46.8%(116/248)。高表达SET与年龄(χ~2=8.936,P=0.003)、吸烟指数(χ~2=3.879,P=0.049)、临床分期(χ~2=7.666,P=0.022)、淋巴结转移(χ~2=3.997,P=0.046)显著相关。Kaplan–Meier分析显示高表达SET的总生存期(Overall survival,OS)、无病生存期(Disease-free survival,DFS)明显低于低表达SET的病人(log-rankχ~2=21.186,P<0.001,OS;log-rankχ~2=7.019,P=0.008,DFS)。单因素分析显示,临床分期(P=0.001,DFS;P=0.008,OS)、淋巴结转移(P=0.002,DFS;P=0.021,OS)、高表达SET(P=0.008,DFS;P<0.001,OS)与无病进展期和总生存期短有关。多因素Cox回归模型分析显示,高表达SET是非小细胞肺癌病人独立预后因素(HR=2.025,95%CI:1.449-2.830,P<0.001,OS;HR=1.448,95%CI:1.027-2.041,P=0.042,DFS)。2.Western blot检测结果示SET在多种非小细胞肺癌细胞系中高表达,并且验证SET siRNA成功敲低A549、H1975、PC9、HCC827细胞中SET蛋白;MTT法检测沉默SET后,明显抑制细胞的增殖能力;平板克隆实验发现沉默SET的表达,明显抑制单个细胞集落形成的能力;抑制SET的表达后,细胞迁移和侵袭能力明显下降,而PP2A的活性升高;此外,敲低SET的表达后,p-AKT、p-ERK/1/2、p-c-Myc表达下调,p21表达上调。提示SET是通过AKT及ERK1/2信号通路起作用的。3.MTT法检测出FTY720、Erlotinib对肺癌细胞系A549、H1975、PC9、HCC827的IC50值,发现PC9、HCC827对Erlotinib敏感,A549、H1975对Erlotinib不敏感。此外,MTT检测细胞增殖发现,与单独使用Erlotinib相比,FTY720联合Erlotinib对细胞的增殖抑制作用更明显。同时,流式细胞术检测显示,两药联合处理细胞时,阻滞于G1期、G2/M期的细胞比例明显增多。此外,Western blot提示FTY720联合Erlotinib处理细胞时,p-EGFR、p-STAT3、p-AKT、p-ERK1/2磷酸化蛋白表达下调,P21、P27表达上调,CyclinD1表达下调。结论:SET癌蛋白在非小细胞肺癌的发生发展中起重要作用,其可以作为预测肺癌患者预后的标志物,并可以作为新的治疗靶点。FTY720、Erlotinib双药联合比单药更显著地抑制肺癌细胞增殖。目前,晚期非小细胞肺癌患者在一线抗癌治疗进展后,并没有有效的治疗方法,FTY720、Erlotinib两药联合治疗为晚期非小细胞肺癌患者提供了新的治疗策略。