柄海鞘血细胞的形态结构和功能的初步研究

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无脊椎动物的血细胞常常被认为是免疫系统中主要的防御因子。由于海鞘类缺乏在更高级的脊椎动物中存在的免疫球蛋白和T细胞受体而依赖于先天性免疫系统,所以研究柄海鞘血细胞不但有助于从理论上解决柄海鞘免疫调节机制问题,也可以为被囊动物成为一种模式生物提供依据。本文采用流式细胞术、电镜细胞化学方法、分光光度计法等方法对柄海鞘的血细胞进行了研究。主要研究内容即结果如下: ⑴流式细胞术对柄海鞘血细胞的分类结果表明,血细胞由五个类群R1,R2,R3,R4,R5组成。类群R1的细胞最小,颗粒程度较为复杂;类群R2的细胞稍大,颗粒程度较简单;类群R3细胞较R2大,细胞颗粒程度复杂;类群R4细胞大小与R3相似,细胞颗粒复杂程度介于R2与R3之间;类群R5细胞最大,颗粒的复杂程度与R3相似。R1,R2,R3,R4,R5五个细胞类群占血细胞总数的百分比分别为:37.15%±1.01%、15.85%±2.91%、16.15%±1.58%、23.65%±3.05%、5.87%±0.31。组织学方法对柄海鞘的血细胞的分类结果显示,柄海鞘血细胞可分为成血细胞,透明细胞,嗜碱性颗粒细胞,嗜酸性颗粒细胞,吞噬细胞。根据细胞大小,颗粒程度,各自占血细胞总数的比例推测,成血细胞,透明细胞,嗜碱性颗粒细胞,嗜酸性颗粒细胞,吞噬细胞分别对应R1~R5。 ⑵电镜细胞化学方法和分光光度法对柄海鞘血细胞中的酸性磷酸酶(ACP)的研究结果表明,柄海鞘部分血细胞呈ACP阳性。血细胞的胞质中有大量ACP阳性颗粒分布,阳性颗粒主要集中分布在细胞膜、线粒体膜与核膜等膜性物质处。强阳性颗粒主要分布在溶酶体中,强阳性颗粒多为圆形,直径为250~950nm或200~350nm,颗粒的电子密度有的密有的疏,一个颗粒的电子密度一般是较一致的,少量颗粒电子密度不均一,从电子密度低的颗粒可以看到阳性颗粒是由许多细微的小颗粒组成的。酸性磷酸酶最适温度为65℃,最适pH值为5.0。大肠杆菌激发后柄海鞘血清中实验组ACP的活力在1h,12h,24h时均低于对照组ACP的活力。 ⑶电镜细胞化学方法和分光光度法对柄海鞘血细胞中依赖卤素的过氧化物酶(MPO)的研究结果表明,柄海鞘几类血细胞均呈MPO阳性。部分血细胞的胞质中有大量MPO阳性颗粒分布,阳性颗粒集中分布在细胞膜与核膜等膜性物质处,部分细胞线粒体中也有阳性颗粒分布。强阳性颗粒主要分布在溶酶体中,强阳性颗粒多为圆形,直径为250~500nm。颗粒的电子密度有的密有的疏,一个颗粒的电子密度一般是较一致的,少量颗粒电子密度不均一,从电子密度低的颗粒可以看到阳性颗粒是由许多细微的小颗粒组成的。过氧化物酶最适温度为35℃,最适pH值为4.5。大肠杆菌激发后柄海鞘血清中实验组MPO的活力在1h时显著高于对照组MPO的活力,在12h,24h时显著低于对照组MPO的活力。 ⑷电镜细胞化学方法和分光光度法对柄海鞘血细胞中碱性磷酸酶(AKP)的研究结果表明,柄海鞘几类血细胞均呈AKP阳性。AKP阳性颗粒主要集中分布在细胞膜与核膜等膜性物质处。强阳性颗粒主要分布在溶酶体中,强阳性颗粒多为圆形,直径为250~950nm。碱性磷酸酶的最适温度为40℃,最适pH值为10.0。大肠杆菌激发后柄海鞘血清中实验组AKP活力在1h,12h,24h时均低于对照组AKP活力。
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