玉米弯孢霉叶斑病（Curvularuia leaf spot of corn）是玉米上的一种重要的叶部病害，流行年份造成严重的经济损失。该病害是由新月弯孢（Curvularia lunata）等弯孢霉属真菌引起的，了解该病原菌的致病分子机理对其病害的有效防治具有重要意义。　　 本研究对玉米弯孢霉叶斑病病菌的原生质制备条件进行了优化。结果表明，玉米弯孢霉叶斑病菌体的培养时间、细胞壁降解酶的种类与配比、酶解时间、以及再生稳渗剂等一系列因素对原生质体释放及再生有明显的影响。根据研究结果总结出玉米弯孢霉叶斑病原生质体制备方法：即（1）从PDA固体培养基上培养10d的菌落上洗下病菌的分生孢子；（2）将孢子按浓度106个/mL接种到改良Fries液体培养基中，28℃下振荡培养24h，过滤洗涤收集菌丝；（3）用10㎎/mL溶壁酶、10㎎/mL崩溃酶和10㎎/mL蜗牛酶组成的混合酶在30℃，150r/min的条件下酶解6h；（4）将酶解好的原生质体的酶解溶液用3层擦镜纸过滤；（5）用已灭菌的0.7 mol/L山梨醇溶液冲洗，将冲洗液在4000r/min，4℃条件下离心10min，弃上清，再用STC洗涤2次后得到所需浓度的原生质体。　　 本研究以含有潮霉素磷酸转移酶基因的质粒（pUCATPH）利用限制酶介导整合转化（restriction enzyme-mediated integration，REMI）玉米弯孢霉叶斑病菌野生菌株WD-1，共获得了165个转化子。将这些转化菌株于PDA上培养3代，发现所有转化子各子代均能在含200μg/mL潮霉素的PDA培养基上生长，而野生菌株WD-1不能生长，说明转化子在遗传上是稳定的。对这些突变体的基因组进行了PCR扩增，发现所有参试基因组中都能扩增检测到潮霉素磷酸转移酶基因（hph）序列。经对所选取的5个转化子进行生长速度和产孢量测定，发现4个转化子的产孢量低于野生菌株WD-1，有1个转化子的产孢量较野生菌株WD-1升高。对所选取的转化子在PDA上生长速度进行测定，结果发现4个转化子的生长速度和野生菌株相比有所减慢。　　 Brn1基因（1，3，8-三羟基萘还原酶基因）是与黑色素合成相关的重要基因。关于其致病性的研究，本文根据同源重组原理，以质粒pUCATPH为基础构建了带有潮霉素基因和绿色荧光蛋白基因的载体pUC-JB，以REMI介导的转化手段转化玉米弯孢霉叶斑病病菌原生质体，共获得29个遗传稳定的转化子。通过PCR验证没有得到真正的突变体。　　 启动子与绿色荧光蛋白（gfp）融合表达实验表明：基因在Curvularialunata的营养菌丝、分生孢子中均表达，其中孢子中荧光强度稍弱。