产酸丙酸杆菌FS1026丙酸发酵的研究

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根据丙酸的化学性质,成功建立丙酸HPLC检测法,同时根据丙酸杆菌的生长特性,构建了一个便捷、准确的筛选丙酸产生菌的方法,成功从市售奶酪中筛选出一株丙酸高产菌FS1026;检测该菌株生理生化特性结合16S rDNA全序列分析构建系统进化树,鉴定该菌株为产酸丙酸杆菌(Propionibaeterium acidipropionici)。首先,采用单因素实验和响应面实验相结合,对FS1026的丙酸液体发酵进行条件优化。确定种子培养时间为72h;最优发酵条件为:最适温度33℃,pH为7.36,接种量10%,装液量150mL/250mL三角瓶。最适发酵培养基成分为:葡萄糖56.62g/L,酵母粉43.25g/L,蛋白胨7g/L, K2HPO4 24g/L, MgSO4 0.7g/L。在分批’发酵中丙酸产量为20.33g/L,丙酸合成的转化率为35.91%。其次,对聚乙稀醇(PVA)与海藻酸钠互配固定化包埋FS1026细胞及固定化细胞丙酸发酵进行条件优化,并进一步考察其多批次固定化发酵稳定性。结果表明最佳固定化条件为:PVA 10.8g/L,海藻酸钠1.5g/L的固定化材料,2%CaC12和50g/L硼酸混合的固定液,12%菌体包埋量,固定化时间8 h。最优固定化细胞丙酸发酵培养基为:葡萄糖75.41g/L,酵母粉30g/L,蛋白胨16.31g/L, K2HPO424g/L, MgSO40.7g/L。最佳补糖方式是间隔24 h将发酵液中的葡萄糖补充到35g/L,最终丙酸产量最高可达42.76g/L;固定化细胞连续10批次发酵后丙酸产量依旧稳定,平均产量可达26.31g/L。采用一种新型的固定化材料磁性Fe304纳米颗粒作为载体,该颗粒经柠檬酸铵改性之后,对FS1026细胞的固定率可以达到96.7%。对经柠檬酸铵改性的磁性Fe304纳米颗粒吸附固定FS1026菌体细胞的固定化条件以及固定化丙酸发酵条件进行了优化,并考察其多批次固定化发酵稳定性。结果表明最佳固定化条件为:w(柠檬酸铵)w(Fe3O4)为3%,w(菌量)/w(Fe304)为1:2.5,固定化pH为4.5,固定化温度为30℃,固定时间为30min。最优固定化细胞丙酸发酵培养基为:葡萄糖75.53g/L,酵母粉52.06g/L,蛋白胨7g/L, K2HPO424g/L, MgSO40.7g/L。最佳补糖方式是间隔12h将发酵液中的葡萄糖补充到20g/L,最终丙酸产量最高可达37.5g/L;固定化细胞连续8批次发酵后丙酸产量依旧稳定,丙酸平均最高产量可达31.81g/L,连续发酵8-14批次之后丙酸平均产量仍可以达到28.30g/L。
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