本文分成两部分:第一部分是关于Pbx4互作蛋白的筛选和验证;第二部分是利用多重定量PCR（Taqman探针）检测端粒酶活性。将这两部分进行分别描述。第一部分本课题组经过进一步家系分析、全基因组测序及相关的细胞学实验确认了影响小鼠后肢发育的功能基因—Pbx4。Pbx（Pre-B cell leukaemia transcription factors）基因是Hox（Homeobox）蛋白的辅助因子,在哺乳动物中Pbx基因包括Pbx1、Pbx2、Pbx3和Pbx4。Pbxs在小鼠胚胎发育过程中都在表达,作为整合介导的中心信号,参与了多种发育的信号通路,影响胚胎发育的进程。脊椎动物中的Pbx4基因的功能在一定程度上是通过Pbx蛋白与Hox和Meis/Prep家族成员的相互作用介导的。它是Hox蛋白的辅助因子,与Hox形成转录调控复合物来调控下游靶基因的表达,从而影响发育信号的表达。基于上述研究背景,本文通过构建p LL3.7-Pbx4-EGFP载体和15个p LL3.7-Hoxs-HA-EGFP载体,共转染到HEKHEK293T细胞中。外源融合表达Pbx4蛋白以及带有HA标签的15个候选Hox蛋白,通过免疫共沉淀技术和Western Blot技术正向和反向验证与Pbx4蛋白相互结合的Hox蛋白,最终得出Hoxc12与Pbx4基因互作。其中有3个基因——Hoxa13、Hoxd11和Hoxd10由于CDS序列富含高GC,导致合成基因失败,无法验证与Pbx4蛋白的相互作用。其次,为了进一步去研究Hoxc12基因的表达谱,本文取了E10.5、E11.5、E12.5、E13.5和E14.5的小鼠胚胎后肢进行时空表达,发现E13.5的小鼠胚胎中Hoxc12基因表达量最高。最后,取E13.5的小鼠不同组织器官,抽取RNA之后通过SYBR Green实时荧光定量检测Hoxc12基因的相对表达情况,结果发现Hoxc12基因在小鼠后肢中表达量最高,心脏中微量表达而在其他组织器官中几乎不表达。第二部分近年来,随着细胞治疗的快速发展,为了更好的规范化控制细胞质量,端粒酶活性检测可以作为细胞是否具有成瘤性风险评估的标准,从而提高细胞生物安全性。目前的端粒酶活性检测方法大多数较繁琐,一些直接检测法通过提取细胞蛋白以及聚丙烯酰胺凝胶电泳显示相差六个碱基的条带来反映端粒酶活性但由于存在一定的放射性污染且成本高,已经很少使用;一些间接检测方法开始应用市场中,通过SYBR Green法测定端粒酶催化亚基TERT（Telomerase reverse transcriptase）的表达量来间接反映端粒酶活性,但由于TERT基因表达量较低导致Ct值波动性大无法准确定量,结果存在一定的孔间差和非特异性扩增,带来假阳性干扰。因此如何提高反应的特异性和灵敏度,以及对细胞基因进行精确定量检测是一个很大的挑战。针对上述问题,本研究建立一种稳定、高灵敏度的方法来检测端粒酶催化亚基TERT表达量,从而检测端粒酶活性。针对TERT的CDS序列设计特异性逆转录引物、两对定量引物及同一种荧光标记的探针,优化反应体系,与内参GAPDH基因在单管中利用荧光定量PCR（Taqman探针法）进行多重反应。并且选用具有端粒酶活性的肿瘤人源细胞HEKHEK293T为阳性细胞以及无端粒酶活性的人正常分化细胞MRC-5为阴性细胞,通过TERT的扩增曲线以及与GAPDH基因之间的△Ct是否稳定判定有无端粒酶活性。并对方法的特异性、稳定性和可靠性进行验证。结果显示:在以特异性逆转录引物作用下得到的c DNA为模板,将TERT基因两对定量引物探针混合后与GAPDH进行多重定量,显著提高了整个体系的灵敏度和TERT荧光信号量,△Rn增强了3倍。其次,在单管中,阳性细胞的c DNA梯度稀释后,能高效检测出TERT基因表达且GAPDH和TERT之间的△Ct保持稳定;阴性细胞的c DNA梯度稀释后TERT基因Ct值未被检出。组内和组间变异系数均小于1%,证明方法稳定。利用该方法对16例样本进行检测,阳性率44%,符合预期要求。检测结果显示癌细胞与正常细胞的TERT基因相对表达水平有显著差异（p＜0.001）,证明该体系可靠。此新型的端粒酶活性检测的方案在肿瘤预判和临床诊断中发挥极大重要性。