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研究背景和目的肾癌是人类十大常见肿瘤之一,其发病率和死亡率正在逐年增加。肾透明细胞癌（ccRCC）是肾癌中最常见的病理类型,其预后往往较差。肾癌的发病机制目前尚不明确,而VHL基因突变被认为与ccRCC的发生和发展密切相关。随着目前对自噬研究的进展,人们发现肾癌与自噬调节之间存在着密切联系,为解释肾癌的发病机制提供了新的研究方向。在过去10多年里,肾癌的治疗经历了早期的非特异性免疫治疗（细胞因子时代）到靶向抑制血管内皮生长因子（VEGF）治疗,如今又开始进入新型免疫治疗时代。虽然这些治疗的进展对肾癌患者的预后有了一定改善,但仍然有许多晚期肾癌和转移性肾癌患者对这些药物不敏感或产生耐药。早期的诊断和及时的手术治疗仍然是局限性肾癌治疗的关键,但由于肾癌的诊断和预后仍缺乏可靠的生物标志物,因此寻找有助于肾癌特异性诊断以及能评估患者预后的生物标志物十分重要。目前已有多项研究表明,溶酶膜体相关蛋白1（LAMP1）在多种肿瘤中呈差异表达,并在肿瘤中发挥重要作用,有希望一种成为潜在的预后因子。然而,关于LAMP1在肾癌中的表达情况及其与患者预后之间的关系却鲜有报道。本次研究目的在于分析LAMP1在ccRCC中表达情况及其临床意义,并研究LAMP1在ccRCC发生发展中发挥的作用和可能的作用机制。方法首先进行生物信息学分析,利用TIMER数据库分析LAMP1基因在不同肿瘤组织和正常组织中的表达情况,并通过TCGA数据库具体分析LAMP1在ccRCC组织和正常组织中的表达差异及其表达水平与临床病理特征之间的关系,还利用ULCAN数据库分析了 LAMP1在ccRCC中蛋白水平上的表达差异。同时通过ROC曲线来评估LAMP 1在肿瘤组织和正常组织中的区分效果。使用单样本基因富集（ssGSEA）方法分析LAMP1与免疫浸润之间的关系。并利用Kaplan-Meier分析和COX回归分析评估LAMP1与生存率的相关性,并基于多因素COX回归分析结果,利用列线图来预测LAMP1对患者预后的影响。接下来,我们还通过收集60对临床ccRCC患者的癌组织和癌旁组织构建了临床标本库,利用Weston blot技术来检测这些组织中LAMP1蛋白的表达差异,并统计分析了LAMP1表达与临床各相关指标的相关性及预后的关系。最后我们通过分子细胞生物学实验,在肾癌细胞系中转染慢病毒来对LAMP1基因过表达,以及过表达后再使用siRNA敲低来做挽救实验,并采用细胞划痕实验、CCK8实验、Transwell实验以及集落形成等细胞功能学实验来观察LAMP1对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。同时还通过分子生物学实验探究了肾癌的关键基因VHL和自噬相关基因LC3C对于LAMP1表达的影响,试图阐述LAMP1上下游的调控通路。结果通过对TIMER数据库中LAMP1基因分析发现该基因在不同肿瘤中高低表达情况不同。在ccRCC组织中LAMP1基因呈显著低表达状态（P＜0.001）。LAMP1低表达患者具有更高的肿瘤T分期、临床病理分期以及组织学分级（P＜0.01）,并且男性中LAMP1表达水平要低于女性（P＜0.05）。而ssGSEA分析发现LAMP1与多种免疫细胞浸润相关（P＜0.05）。并且LAMP1低表达患者与较差的总生存期（OS）、疾病特异性生存期（DSS）、无进展生存期（PFI）有关（P＜0.01）,而在亚组分析中发现LAMP1低表达还与T3＆4期、T3期、M1期、G3＆4期、Stage Ⅲ＆Ⅳ期、StageⅣ期患者的OS较差相关（P＜0.05）。多因素生存分析显示LAMP1是OS的独立预后指标（P＜0.05）。而基于多因素分析的列线图显示出LAMP1对ccRCC患者较好的预测能力。综上,LAMP1在肾癌中起到抑癌作用。60对ccRCC患者的癌及癌旁组织标本的分析发现LAMP1蛋白在癌组织的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.001）。而临床相关性分析显示LAMP1与患者年龄（P＜0.001）、性别（P＜0.001）和T分期（P=0.039）有关,而与M分期、临床分期和核分级无关（P＞0.05）。进一步的生存分析显示LAMP1表达水平（P=0.019）、T分期（P=0.040）、临床分期（P＜0.001）和核分级（P=0.043）是影响ccRCC患者预后的独立因素。通过细胞学实验验证了 LAMP1对肾癌细胞的意义,肾癌细胞系中LAMP1基因的高表达抑制了细胞的增殖、迁移与侵袭,而挽救实验则能恢复细胞的增殖、迁移与侵袭能力。在LAMP1上下游调控通路的研究中发现,当细胞自噬被激活或被阻断后,LAMP1蛋白表达未见明显变化,而当敲低LC3C基因后发现LAMP1蛋白表达下降,过表达LAMP1基因后LC3C蛋白表达反而降低。同时,我们发现在VHL（+）细胞中LAMP1的表达要比VHL（-）细胞中的低。结论上述研究表明,数据库及临床标本研究显示LAMP1在ccRCC中低表达,且LAMP1低表达患者预后更差,细胞实验显示LAMP1可以抑制肾癌细胞的增殖、迁移与侵袭能力。因此LAMP1是一个抑癌因子并且可以作为评估肿瘤分期及预后的生物分子标记物。机制方面研究显示,VHL基因可能通过调控LC3C介导的自噬继而影响LAMP1的表达,这可能影响肾癌靶向药物的疗效,可能作为评估药物疗效的标志蛋白。