末端固定法肝素修饰小口径血管的实验研究

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第一部分制备聚碳酸酯型聚氨酯(PCU)小口径血管目的:利用静电纺丝法制备一种聚碳酸酯型聚氨酯小口径人工血管。方法:将PCU溶解于二甲基甲酰胺(DMF)中,通过静电纺丝法,以低速旋转的特氟纶涂层转轴为收集装置,制备PCU小口径人工血管,并检测其超微结构及力学性能。结果:本实验制备出PCU小口径人工血管,管壁厚度为0.39±0.03 mm,管腔内径为2.94±0.12 mm。扫描电镜显示PCU小口径人工血管纤维直径为732±320 nm,孔隙率为82.8±3.1%。与颈总动脉进行对比,力学性能检测结果为PCU小口径人工血管、小型猪颈总动脉的弹性模量分别为6.28±0.67 MPa、5.07±0.49 MPa;最大拉伸应力为7.44±0.96 MPa、8.79±0.44 MPa。结论:采用静电纺丝技术成功制备出具有高孔隙率、良好力学性能及纳米纤维结构的PCU小口径血管。第二部分肝素表面修饰聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管目的:探讨肝素表面修饰小口径血管的一种新型方法。方法:利用等离子技术对聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管管腔及表面进行处理,从而在管腔内、外表面产生一层稳定的一级和二级胺的超微薄膜。将等离子体处理的聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管置入以氰基硼氢化钠耦合缓冲液和肝素钠制备的肝素溶液中,肝素通过末端固定共价结合到聚碳酸酯型聚氨酯血管内外表面。检测小口径血管肝素结合含量及其稳定性,比较肝素表面修饰前后聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管的力学性能。结果:经等离子体处理后,聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管外观由白色变为淡黄色。肝素共价结合定量分析结果示管壁结合肝素质量为41±3.6μg/cm3,肝素与聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管结合稳定性好。PCU小口径血管肝素修饰后弹性模量及最大拉伸应力分别为5.87±0.40 MPa,7.12±0.74 MPa,与未接肝素时力学性能相比P>0.05,无统计学差异。结论:利用末端固定技术可有效将肝素分子共价结合于经等离子体处理的聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管管腔内外表面,并且不影响其力学性能。小口径人工血管具有良好抗凝活性。第三部分肝素表面修饰的聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管小型猪体内实验研究目的:研究具有体外抗凝活性的聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管小型猪体内内皮化及重构。方法:将具有体外肝素抗凝活性的聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管行端-端吻合移植到小型猪左侧颈总动脉。术后4周、6周行彩色超声多普勒检查,检测小口径血管通畅率。管壁行HE、Masson、EVG染色及v WF、α-SMA免疫荧光染色,观察聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管管腔内皮化及管壁重构情况。结果:6只小型猪成功完成左侧颈总动脉血管移植模型,3只随访4周,通畅率100%(3/3);3只随访6周,通畅率100%(3/3)。HE、Masson、EVG染色示:术后4周移植物中间段可见部分细胞迁移至管壁,并可见少量弹力纤维;近吻合口处管壁有更多细胞迁移。术后6周移植物中间段可见大量细胞迁移至管壁,弹力纤维较前增多。v WF、α-SMA免疫荧光检测发现:术后4周血管中间段内壁可见单层不连续的v WF阳性细胞、管壁内可见α-SMA阳性细胞;吻合口处管腔内壁可见单层连续v WF阳性细胞,管壁内可见较多α-SMA阳性细胞。术后6周血管移植物中间段内壁可见单层连续v WF阳性细胞,管壁内可见较多α-SMA阳性细胞;吻合口处管腔内壁可见单层连续的v WF阳性细胞,管壁内可见大量α-SMA阳性细胞,排列规则。结论:末端固定法肝素修饰的聚碳酸酯型聚氨酯小口径血管具有良好的短期通畅率。
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