论文部分内容阅读
棘豆属（Oxytropis）的小花棘豆（O.glabra）在内蒙古的草原区和荒漠区广泛分布，许多植株含有毒生物碱苦马豆素，对牲畜而言是毒草，但小花棘豆有重要生态价值和药用价值，经脱毒处理的小花棘豆还可是优良牧草。另外苦马豆素是具有重要价值和开发前景的抗肿瘤药物。本研究用单株小花棘豆的茎切段做为外植体，体外分离培养内生真菌，并通过微生物学和分子生物学方法对其进行研究。扩增测定真菌5.8SrDNA/ITS区序列并分析，根据微生物学和分子生物学研究结果鉴定内生真菌类群；未培养出内生真菌的小花棘豆单株植物则使用真菌特异引物扩增内生真菌5.8SrDNA/ITS区序列并测序；使用气相色谱法测定单株小花棘豆植物及培养得到的内生真菌中的苦马豆素含量，分析小花棘豆内生真菌与苦马豆素之间的关系；选取了小花棘豆内生真菌OW5.3，对其进行了优化固体培养条件的探索,在不同碳源、初始pH条件下，检测了内生真菌的生长速度，并利用气相色谱技术测定了内生真菌菌丝体中苦马豆素的含量，分析不同培养条件对菌落生长速度及苦马豆素含量的影响。研究结果如下：1.对采自4个不同样地的60株单株小花棘豆进行真菌5.8SrDNA/ITS区序列扩增，全部扩增出了真菌序列；另外，经气相色谱检测60株小花棘豆所含的苦马豆素，结果除一株为痕量外，其余均测出准确含量。2.体外分离培养得到16株小花棘豆内生真菌，其菌落形态等微生物学特征均与前人得到的小花棘豆内生真菌及埃里砖格孢属真菌Embellisiasp.L12一致；经测序分析其5.8SrDNA/ITS序列也与卢萍提交的小花棘豆内生真菌序列相同，与Embellisiasp.L12比对在5.8SrDNA区有一个变异位点，认为此16株内生真菌属于Embellisia。另外，16株内生真菌均测得含有苦马豆素。3.优化培养结果显示：当菌株OW5.3起始pH为7.0时表现为生长速度快及苦马豆素含量高；以葡萄糖为碳源时生长速度较快；以燕麦片为碳源时菌丝体的苦马豆素含量最高。