目的克隆大鼠原癌基因pim-3并构建真核表达重组质粒pEGFP-N₂/pim-3,观察它在真核细胞:SMMC-7721中的表达情况以及对细胞凋亡的影响。方法利用Trizol从液氮保存的大鼠骨骼肌组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获取pim-3 cDNA,并构建重组质粒pEGFP-N₂/pim-3,转化用CaCl2法制备的大肠杆菌JM-109菌株,酶切以及测序鉴定.将重组质粒通过脂质体介导转染肝癌SMMC-7721细胞后利用倒置荧光显微镜观察基因表达情况,并利用流式细胞术及MTT比色试验对转染细胞的生物学行为进行检测。结果将RT-PCR产物全部用于低熔点琼脂糖凝胶电泳、回收,在DL 2000 Marker 1000bp附近可见清晰条带,与实验设计符合;阳性克隆质粒的酶切电泳和测序结果表明,大鼠pim-3 cDNA的克隆和重组质粒pEGFP-N₂/pim-3的构建成功;重组质粒pEGFP-N₂/pim-3转染组凋亡细胞占3.5%,质粒pEGFP-N₂转染组凋亡细胞占10.7%,而仅加入转染液的空白组凋亡细胞占11.0%,重组质粒转染组与两对照组之间差异有统计学意义（P<0.05）;倒置荧光显微镜可以观察到pim-3在SMMC-7721细胞中的正常表达;MTT比色试验显示原癌基因pim-3能够明显抑制细胞凋亡。结论真核表达重组质粒pEGFP-N₂/pim-3构建成功;原癌基因pim-3能明显抑制肝癌细胞凋亡。