第一部分LYVE-1、VEGFR-3、Podoplanin、Prox-1在结直肠癌和癌旁组织中的表达[背景与目的]淋巴管系统标志物在肿瘤淋巴结转移过程中的作用正逐渐为人们所了解,与淋巴管系统标志物在结直肠癌侵袭转移中的作用相关的研究较少。淋巴管系统标志物主要包括淋巴管内皮标志物和淋巴管内皮生长因子两大类,本文旨在研究淋巴管内皮标志物淋巴管内皮透明质酸受体-1 (LYVE-1)、血管内皮生长因子受体-3 (VEGFR-3)、肾小球足突细胞膜黏蛋白(Podoplanin)、同源异形盒基因转录因子-1(Prox-1)在结直肠癌和癌旁的表达差异性,同时分析其与淋巴结转移的相关性。[材料与方法]收集中国医学科学院肿瘤医院2013年8月至2014年3月年间手术治疗的结直肠癌患者新鲜癌组织以及癌旁2cm肠粘膜组织标本各47例,其中按淋巴结分期NO期20例、Nla期7例、N1b期5例、N2a期8例、N2b期7例；按病理分期Ⅱa期18例、Ⅱb期2例、Ⅲb期18例、Ⅲc期9例。实时荧光定量PCR检测LYVE-1、VEGFR-3、Podoplanin和Prox-1在癌和癌旁组织中的表达。分析4者在癌组织和癌旁组织中的表达；分析其在无淋巴结转移和伴淋巴结转移的结直肠癌患者癌组织中表达的差异性,在无淋巴结转移和伴淋巴结转移的癌旁组织中表达的差异性；分析在淋巴结分期N1a、N1b、N2a和N2b期癌组织中表达的差异性,在淋巴结分期N1a、N1b、N2a和N2b期癌旁组织中表达的差异性；分析其在病理分期Ⅱa、Ⅱb、Ⅲb和Ⅲc期癌组织中表达的差异性,在病理分期Ⅱa、Ⅱb、Ⅲb和Ⅲc期癌旁组织中表达的差异性。[结果]LYVE-1、VEGFR-3、Podoplanin和Prox-1在癌组织中表达的阳性率分别为100%、93.6%、100%和91.4%,而在癌旁组织中表达的阳性率为100%、100%、100%和87.2%。LYVE-1、VEGFR-3在癌旁组织的表达明显高于在癌组织的表达(8.393±10.248vs.0.498±0.794, P<0.001; 5.028±8.253 vs.1.741±3.065, P=0.013), Podoplanin在癌组织中的表达高于在癌旁组织中的表达(3.365±4.552 vs.1.634±1.421, P=0.016), Prox-1在癌和癌旁组织中的表达无明显差异(53.729±161.664 vs.11.323±20.637, P=0.078)。LYVE-1、VEGFR-3、Podoplanin和Prox-1在无淋巴结转移和伴淋巴结转移的结直肠癌患者癌组织中表达均无明显差异(0.592±0.953 vs.0.372±0.504,P=0.354; 1.926±3.275 vs.1.478±2.805, P=0.631; 2.965±.405 vs.3.904±6.459, P=0.490; 72.350±.542 vs.39.936±.925, P=0.503),在无淋巴结转移和伴淋巴结转移的癌旁组织中表达均亦无明显差异(9.046±11.375vs.7.511±.706, P=0.617; 4.681±5.345 vs.5.521±11.339, P=0.738; 1.565±1.230 vs.1.773±.670, P=0.625; 16.110±30.777 vs. 7.776±5.529, P=0.174)。在淋巴结分期N1a、N1b、N2a和N2b期癌组织中的表达无明显差异(0.383±0.420vs.0.586±.013vs.0.630±.871 vs.0.762±.452, P=0.914; 0.868±.928 vs.3.501±5.929 vs.1.116±1.052 vs.2.786±.973,P=0.493; 1.719±1.545 vs.2.716±.507 vs.3.379±.163 vs.3.914±3.710, P=0.370; 20.585±.348 vs.43.801±.398 vs. 61.697±.726 vs.31.658±37.608, P=0.780),在淋巴结分期N1a、N1b、N2a和N2b期癌旁组织中的表达同样无明显差异(6.628±.827 vs.7.645±.339 vs. 12.526±17.303 vs.8.487±.186, P=0.784; 4.093±.136 vs.2.747±2.386 vs.4.975±.504 vs.6.316±.428, P=0.955; 1.156±.759 vs.0.958±0.642 vs.1.640±.527 vs. 2.322±1.346, P=0.199; 9.230±.486 vs.3.238±.558 vs.9.090±.263 vs.8.061±.542, P=0.234)在病理分期Ⅱa、Ⅱb、Ⅲb和Ⅲc期癌组织中的表达无明显差异(0.346±.491 vs. 0.609±0.774 vs.0.400±0.570 vs.0.975±1.420, P=0.242; 1.306±2.814 vs.2.940±.182 vs.1.522±.207 vs.2.735±3.451, P=0.654; 3.321±6.361 vs.9.155±6.612 vs. 2.459±.780 vs.3.975±.215, P=0.254; 78.362±246.080 vs.18.240±18.577 vs. 25.867±33.432 vs.68.075±.580, P=0.784),在病理分期Ⅱa、Ⅱb、Ⅲb和Ⅲc期癌旁组织中的表达仍无明显差异(6.833±7.620 vs.13.612±19.239 vs.9.315±13.150 vs. 8.508±7.250, P=0.793; 5.011±11.570 vs.9.854±.435 vs.4.399±6.096 vs. 5.246±3.651, P=0.860; 1.788±.731 vs.1.637±1.404 vs.1.352±1.153 vs.1.992±1.338, P=0.699; 16.754±.445vs.10.315±.205 vs.7.685±5.501 vs.7.958±1.914, P=0.576)。[结论]LYVE-1、VEGFR-3、Podoplanin和Prox-1在结直肠癌组织和癌旁组织阳性表达率高；LYVE-1、VEGFR-3在癌旁组织中的表达高于在癌组织中的表达,而Podoplanin在癌组织中的表达高于在癌旁组织中的表达；四种标记物在癌组织中的表达与淋巴结转移、病理分期无明显相关性,在癌旁组织中的表达同样与淋巴结转移、病理分期无明显相关性；本研究不支持LYVE-1、VEGFR-3、Podoplanin和Prox-1可以用来预测结直肠癌淋巴结是否发生转移,LYVE-1、VEGFR-3、 Podoplanin和Prox-1在结直肠癌中的意义尚需大样本验证。第二部分结直肠癌淋巴结检出数目与预后相关性[背景与目的]结直肠癌在所有恶性肿瘤中的发病率和死亡率高居不下,如何改善患者的预后倍受临床医生和患者关注。影响结直肠癌患者预后的因素有很多,其中淋巴结检出数目对患者术后生存率和复发率的影响近年来颇受重视,本研究旨在研究淋巴结检出数目对患者预后的影响,并对影响淋巴结检出数目的各因素进行分析。[材料与方法]回顾性分析中国医学科学院肿瘤医院2006年7月至2010年2月间收治的867例结直肠癌患者的临床病理资料。比较五年内复发者和无复发者、死亡者和健在者的淋巴结检出数目；以术后五年生存率为主要依据,确定最佳淋巴结检出数目N数值；计算所有患者的复发率及五年生存率,分析患者自身因素、肿瘤因素、手术方式等对复发率及五年生存率的影响,观察淋巴结检出数目与患者预后的相关性；将所有患者以N为界限分为<N和≥N两组,分别计算各影响因素内<N和≥N两组的不同生存率和复发率；分析淋巴结检出数目的影响因素。[结果]所有患者五年内复发率为10.9%,五年总的生存率为70.8%。复发者平均淋巴结检出数目13.7±11.6枚,无复发者19.0±12.0枚(P<0.001),五年内死亡者平均淋巴结检出数目16.2±10.5枚,健在者19.3±12.6枚(P=0.001)。本研究确定的最佳淋巴结检出数目为12枚。按12枚淋巴结分为<12枚组和≥12枚组,单因素分析显示,淋巴结检出<12枚组的五年生存率为58.8%,≥12枚组为76.1%(P<0.001)；<12枚组的复发率为22.3%,而≥12枚组为5.2%(P<0.001)；多因素分析显示,淋巴结检出数目是影响结直肠癌术后五年生存率的独立危险因素之一(P<0.001)。将各指标依据淋巴结检出最佳数目再次各自分组进行分析的结果显示,五年生存率在男性患者<12枚组和≥12枚组分别为59.6%和74.0%(P<0.001)、女性患者为68.0%和73.4%(P=0.022)；<50岁患者分别为67.1%和73.5%(P=0.024)、≥50岁患者为62.4%和73.4%(P<0.001)；在肿瘤<5cm患者为66.4%和74.2%(P<0.001)、肿瘤≥5cm患者为54.2%和71.1%(P<0.001)；在中分化患者为66.5%和74.1%(P<0.001)、低分化患者为50.0%和73.2%(P<0.001)；在腺癌患者为63.9%和75.1%(P<0.001)；在无脉管瘤栓患者为65.7%和74.2%(P<0.001)；在无神经侵犯患者为65.4%和73.5%(P<0.001)；在肿瘤浸润深度为T2期患者为52.6%和84.6%(P<0.001)、在T3期患者为64.5%和74.4% (P<0.001)；在Ⅱ期患者为68.2%和78.9%(P<0.001)、Ⅲ期患者为54.8%和69.0% (P<0.001)。复发率在男性患者<12枚组和≥12枚组中分别为23.2%和7.0% (P<0.001)、女性患者为15.0%和6.9%(P=0.015)；<50岁患者分别为15.1%和6.5%(P=0.032)、≥50岁患者为20.2%和7.1%(P<0.001)；在肿瘤<5cm患者为18.1%和6.2%(P<0.001)、肿瘤≥5cm患者为22.0%和9.2%(P=0.013)；在中分化患者为18.0%和7.3%(P<0.001)、低分化患者为21.7%和4.7%(P=0.002)；在腺癌患者为18.0%和6.2%(P<0.001)；在无脉管瘤栓患者为17.9%和6.4%(P<0.001)；在无神经侵犯患者为18.0%和6.1%(P<0.001)；在肿瘤浸润深度为T2期患者为26.3%和13.6%(P=0.013)、在T3期患者为18.4%和6.6%(P<0.001)；在Ⅱ期患者为14.7%和4.7%(P<0.001)、Ⅲ期患者为24.2%和9.3%(P<0.001)。按照淋巴结转移率(LNR)划分,将所有Ⅲ期患者分为LNR<0.125,0.125≤LNR <0.25,0.25≤LNR<0.375, LNR≥0.3754组,4组患者的复发率分别为9.8%、12.1%、20.3%和32.5%(P=0.001),五年生存率分别为73.8%、65.7%、57.4%和38.5%(P<0.001)。Ⅲ期结直肠癌患者术后淋巴结检出数目明显多于Ⅱ期,分别为21.7±12.9枚和15.4±10.4枚(P<0.001)；肿瘤大小影响淋巴结检出数目,<5cm组的淋巴结检出数目为17.9±11.3枚,而≥5cm组为20.2±14.3枚(P=0.020)；高分化、中分化和低分化结直肠癌淋巴结检出数目分别为15.6±9.3枚、19.1±12.7枚和18.1±10.9枚(P=0.007)；原发肿瘤浸润深度不同的患者淋巴结检出数目差异明显,pT2、pT3和pT4期的淋巴结检出数目分别为17.44±8.9枚、18.2±11.8枚和21.3±16.1枚(P=0.031)。[结论]结直肠癌术后生存率和复发率受多种因素影响,淋巴结检出数目是重要影响因素之一；依据该研究结果,结直肠癌根治术最佳淋巴结检出数目为12枚,淋巴结检出数目≥12枚患者的五年生存率明显优于<12枚者,复发率明显低于<12枚者；LNR是Ⅲ期结直肠癌患者的预后影响因素,生存率随LNR的增加而降低,复发率随LNR的增加而增高；肿瘤大小、分化程度、肿瘤浸润深度和病理分期影响淋巴结检出数目。