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背景肺癌已成为影响人民生命健康的重要疾病,但其目前的治疗效果仍不尽如人意,即便是普遍认为可手术根治的Ⅰ期患者,仍有25%在5年之内死于复发或转移。虽然基于常规病理检验的肺癌分期系统可较好地提示患者的预后,但实际应用中人们发现,同为pⅠ期患者预后往往并不一定完全相同。这提示即使临床上认为可通过手术完全切除的早期肺癌患者术前可能已经发生了微小的、常规方法难以发现的转移,即微转移。而目前临床上的常规检查,包括影像学、组织病理学等,难以早期判断转移的发生状况。这启示我们应该从微转移的角度继续探讨肺癌的准确分期。微转移的检测方法包括：连续组织切片法、免疫组化法、血清学检查、流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等。RT-PCR技术的敏感性高,正逐渐为人们所接受。常用的肺癌微转移检测常用分子标记主要分为四大类：组织特异性蛋白质、肿瘤特异性抗原、癌基因和抑癌基因、组织特异性基因。组织特异性基因中的肺特异性X蛋白(LUNX)是人类肺组织特异性基因,有可能成为具有高敏感度和特异性的肺癌微转移检测指标。某些与肿瘤转移有关的基因往往在发生转移之前即已出现表达的异常,此时很可能是发生微转移的早期阶段。发现这些基因表达的改变与微转移之间的关系有利于对患者进行更为准确的分期。只有进行准确的术后分期,才能为肺癌患者多学科综合治疗措施的制定提供最重要的前提条件。第一部分以LUNX mRNA为标志物测定Ⅰ期非小细胞肺癌淋巴结微转移及其对预后的影响研究目的基于RT-PCR法,以LUNX mRNA为标志物,检测pⅠ期非小细胞肺癌淋巴结微转移,并研究其与早期肺癌患者临床病理特征和预后的关系,探讨以此方法检测淋巴结微转移的可行性。研究方法收集根治性手术治疗的Ⅰ期非小细胞肺癌病例,并以免疫组化测定淋巴结细胞角蛋白(cytokeratins, CKs)表达的方法排除常规病理遗漏的转移病例,最终收集40例pⅠ期病例。另选10例肺部良性病变手术病例作为对照。所有肺癌患者都接受根治性肺叶切除,不包括全肺切除及各种姑息性切除的病例。根治性切除包括系统纵隔淋巴结清扫,即清扫至少包括3站纵隔淋巴结,总数不少于6枚。以RT-PCR方法测定各组淋巴结LUNX mRNA表达的情况,以此作为判定淋巴结微转移的标志物,分析淋巴结微转移与pⅠ期非小细胞肺癌各临床病理特征、术后生存和无病生存的关系。结果所有CKs表达阳性的淋巴结于病理复核时均发现转移癌细胞或细胞团。剔除淋巴结CKs表达阳性的病例,仅保留CKs表达阴性的病例。LUNX mRNA的表达：10例肺部良性病变的肺门淋巴结,均表达阴性。40例肺癌病例的原发灶均表达阳性(100%),14.6%的淋巴结和11.1%的纵隔淋巴结表达阳性。16位(40%)患者的至少一站淋巴结LUNX mRNA表达阳性,LUNX分期升级。重新分期后,LUNX-Ia期13例,Ⅰb期11例,Ⅱa期3例,Ⅱb期6例,Ⅲa期7例。淋巴结微转移与性别、年龄、病理分期、病理类型、清扫淋巴结站数、清扫纵隔淋巴结站数等无关(P>0.05)。影响术后生存的因素包括：LUNX分期(P<0.01)、纵隔淋巴结微转移(P<0.01)、清扫淋巴结总站数(P<0.01)、清扫纵隔淋巴结站数(P<0.05)、病理分级(P<0.05)。有纵隔淋巴结微转移的患者的死亡风险是无纵隔淋巴结微转移的患者的30.3倍(P<0.01),清扫纵隔淋巴结站数越多的患者死亡风险也随之提高,清扫6组纵隔淋巴结的患者的死亡风险是仅清扫3组纵隔淋巴结的患者的2.151倍(P<0.05)。影响术后无病生存的因素包括：LUNX分期(P<0.01)、淋巴结微转移(P<0.05)、纵隔淋巴结微转移(P<0.01)、清扫淋巴结总站数(P<0.01)、清扫纵隔淋巴结站数(P<0.01)、病理分级(P<0.05)。有纵隔淋巴结微转移的患者的复发风险是无纵隔淋巴结微转移的患者的19.6倍(P<0.01)。结论应用免疫组化测定淋巴结CKs的表达只能发现常规病理漏检的转移,而非真正的“微转移”。pⅠ期非小细胞肺癌区域淋巴结LUNX mRNA的异常表达与患者的术后总体生存和无病生存相关,能够反映淋巴结微转移的情况。通过对pNO期非小细胞肺癌区域淋巴结LUNX mRNA异常表达的检测,可以发现其中的高危患者亚群,有助于对肺癌患者进行更精确的分期。如能早期加以干预,可以改善这部分患者的预后。第二部分nm23与E-cadherin蛋白表达与Ⅰ期非小细胞肺癌淋巴结微转移及预后的关系研究目的以免疫组化法检测nm23和E-cadherin在pⅠ期肺癌原发灶的表达,并探讨其与淋巴结微转移和预后的相关性。研究方法病例选择、手术方式、标本采集见第一部分。以免疫组化法检测nm23和E-cadherin在肺癌原发灶的表达,并探讨其与淋巴结微转移和预后的相关性。结果nm23表达阳性率在肺癌组织和正常肺组织间无显著性差异(P>0.05),而E-cadherin表达阳性率在肺癌组织显著高于正常肺组织(P<0.01)。nm23和E-cadherin在不同病理分期的肺癌组织中的表达无显著差异(P>0.05),但在以LUNX mRNA表达为标志的不同分子分期间有显著差异(P<0.01)。nm23低表达组淋巴结微转移率61.90%(13／21)显著高于高表达组的15.79%(3/19) (P< 0.05). E-cadherin低表达组淋巴结微转移率68.42%(13／19)显著高于高表达组的14.29%(3／21)(P<0.01)nm23低表达组和高表达组的术后生存时间分别为20.90±1.81个月和26.12±0.60个月(P<0.05),术后无病生存时间分别为17.90±2.45个月和25.24±1.06个月(P> 0.05)。E-cadherin低表达组和高表达组的术后生存时间分别为21.06±1.93个月和25.42±0.88个月(P>0.05),术后无病生存时间分别为18.44±2.46个月和23.95±1.65个月(P<0.05)。Cox Regression风险比例模型分析结果提示肺癌原发灶nm23表达水平也是影响术后生存的独立危险因素,nm23低表达者的死亡风险是高表达者的13.31倍(P<0.05)。结论nm23和E-cadherin蛋白表达的下调预示着淋巴结微转移的风险增加。nm23蛋白低表达组的术后总体生存降低,且是术后总体生存的独立预后影响因素。通过对早期非小细胞肺癌原发灶nm23和E-cadherin蛋白表达的检测,可以预测淋巴结微转移的发生,有助于建立更为精确的分子分期,发现其中的高危亚群,并帮助判断预后。