论文部分内容阅读
目的: 验证NPC细胞中Annexin I/S100A9/Vimentin蛋白间相互作用;检测相互作用蛋白Annexin I/S100A9/Vimentin在NPC组织和细胞中的表达情况,分析其在NPC组织和细胞中表达的相关性;建立Annexin I基因表达上调和下调/缺失的NPC细胞系,分析Annexin I表达上调或下调/缺失对NPC细胞S100A9/Vimentin表达的影响及对NPC细胞侵袭迁移能力等生物学行为的影响。初步阐明Annexin I/S100A9/Vimentin相互作用蛋白在NPC细胞体外侵袭迁移中的作用,为NPC防治提供一定的实验依据。 方法: 采用免疫共沉淀结合Western blot验证鼻咽癌6-10B细胞中AnnexinⅠ/Vimentin/S100A9蛋白间的相互作用;收集临床鼻咽癌组织标本,免疫组织化学染色检测鼻咽癌组织中Annexin I/S100A9/Vimentin的表达情况,双变量Pearson统计分析Annexin I/S100A9/Vimentin在鼻咽癌组织中表达水平的相关性;Western blot检测不同分化程度(CNE1/CNE2)和不同转移潜能(5-8F/6-10B)的NPC细胞系中Annexin I/S100A9/Vimentin的表达情况;运用脂质体转染技术,建立Annexin I表达上调细胞系5-8F-Annexin I(+)和空载对照细胞系5-8F-Annexin I(-),以及Annexin I表达下调/缺失NPC细胞系6-10B-RNAi(+)和空载对照细胞系6-10B-RNAi(-),通过Western blot检测Annexin I表达上调或下调/缺失对各重组NPC细胞系中S100A9/Vimentin表达水平的影响,通过transwell侵袭迁移实验和划痕实验检测Annexin I表达改变后对各重组NPC细胞系侵袭迁移等生物学行为的影响。 结果: 1.免疫共沉淀结合Western blot验证鼻咽癌6-10B细胞中AnnexinⅠ/Vimentin/S100A9蛋白间的相互作用,结果显示:在NPC细胞中,Annexin I、S100A9、Vimentin间存在相互作用。 2.免疫组织化学染色检测AnnexinⅠ/S100A9/Vimentin相互作用蛋白在临床32例鼻咽癌组织中的表达情况,结果显示:在NPC组织中,S100A9与AnnexinⅠ的表达成负相关(r=?0.640,P<0.01);Vimentin与AnnexinⅠ的表达成负相关(r=?0.422,P<0.05);S100A9与Vimentin的表达成正相关(r=?0.390,P<0.05)。 3.Western blot检测AnnexinⅠ/S100A9/Vimentin相互作用蛋白在CNE1(高分化)、CNE2(低分化)、5-8F(高转移潜能)、6-10BNPC(低转移潜能)细胞系中的表达,结果显示:AnnexinⅠ在CNE1和6-10B细胞中的表达较Vimentin和S100A9强(P<0.05);在CNE2和5-8F细胞中AnnexinⅠ的表达较Vimentin和S100A9弱(P<0.05)。 4.Western blot检测NPC细胞系5-8F、Annexin I表达上调的细胞系5-8F-Annexin I(+)、NPC细胞系6-10B以及Annexin I表达下调/缺失的NPC细胞系6-10B-RNAi(+)四种细胞中AnnexinⅠ,Vimentin和 S100A9的表达情况,结果显示:AnnexinⅠ在5-8F-AnnexinⅠ(+)细胞中表达增强时,Vimentin和S100A9表达明显降低(P<0.05);AnnexinⅠ在6-10B-RNAi(+)细胞中表达降低时,Vimentin和S100A9的表达则明显增强(P<0.05);转染后各组细胞的Transwell和划痕实验显示,AnnexinⅠ负性调控S100A9和VImentin的表达后能影响NPC细胞的体外侵袭迁移能力。 结论: 1.在NPC细胞中,AnnexinⅠ/Vimentin/S100A9能形成相互作用; 2.AnnexinⅠ可能通过影响S100A9/Vimentin蛋白的表达抑制NPC细胞的体外侵袭迁移。