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环丙沙星(CIP)属氟喹诺酮类(FOs)药物，是一种人和动物可共用的广谱杀菌药，是恩诺沙星(ENRO)的主要代谢产物。恩诺沙星同属于FQs合成的抑菌剂，是动物专用药物，在水产和畜禽饲养过程中经常用于动物疾病的预防和治疗。然而恩诺沙星在动物体内有较长的半衰期，会在动物体内代谢为仍有杀菌作用的环丙沙星。因此，对恩诺沙星的代谢产物环丙沙星进行监测，对于食品的安全和人群的健康至关重要。因此有必要建立简单、快速、高通量的检测方法检测动物性食品中的环丙沙星。本研究依据免疫学基本原理，对动物免疫后得到多克隆抗体，在此基础上建立关于环丙沙星的直接竞争酶联免疫分析方法与胶体金定量免疫层析方法，两种方法均有较高的灵敏度与特异性，适用于动物性食品中环丙沙星的快速检测。
CIP多克隆抗体的制备。通过活泼酯法将钥孔血蓝蛋白(KLH)与CIP偶联，得到CIP-KLH作为免疫原。用制备好的CIP-KLH免疫动物，免疫完成后心脏取血获得抗血清，经凝胶柱纯化后，获得CIP多克隆抗体。
CIP直接竞争酶联免疫分析方法的研究。并对抗体包被质量浓度与酶标抗原的稀释倍数、封闭液浓度和包被条件进行了优化，获得最佳反应体系，建立环丙沙星直接竞争ELISA方法。结果显示该方法在0.01ng/mL-1000ng/mL的范围呈现良好线性关系，灵敏度(IC50)为4.17ng/mL，最低检测限(IC15)可以达到5.49×10-2ng/mL。该方法的板内和板间变异系数为5.22％、5.97％。对恩诺沙星的交叉反应率为1.22％，对氧氟沙星、依诺沙星的交叉反应率均小于0.1％，说明该方法的稳定性和特异性较好。选择牛奶、牛肉、虾肉和鱼肉四种样品，研究基质消除方法进行加标试验，测定加标回收率在83.92％-99.26％之间。
建立CIP胶体金免疫层析的方法用于快速定量检测动物性食品中环丙沙星残留。通过紫外、透射电镜和激光粒度分析仪对柠檬酸三钠还原法制备的胶体金溶液进行了表征。同时对金标抗体的pH、蛋白标记量和金标复溶液进行优化，制备了金标抗体。以NC膜为固相载体，CIP-OVA和羊抗兔作为检测线和质控线，并对包被条件、样品垫和检测时间进行优化，采用胶体金试纸分析仪测定信号强度建立标准曲线。检测时间为10分钟，该方法的线性范围为0.78-25ng/mL，检出限为0.75ng/mL。本试验选择鱼肉、牛肉、虾肉和牛奶四种样品进行试验，研究基质消除方法，每个样品进行4个加标标准，回收率在77.47％-89.69％之间。
两种CIP快速检测方法的验证。通过高效液相色谱色谱法对建立的两种方法进行验证，结果表明均有良好的线性关系，并且R2都在0.98以上，说明建立的直接竞争酶联免疫法和胶体金免疫层析法均能满足动物性食品中环丙沙星残留的检测。
CIP多克隆抗体的制备。通过活泼酯法将钥孔血蓝蛋白(KLH)与CIP偶联，得到CIP-KLH作为免疫原。用制备好的CIP-KLH免疫动物，免疫完成后心脏取血获得抗血清，经凝胶柱纯化后，获得CIP多克隆抗体。
CIP直接竞争酶联免疫分析方法的研究。并对抗体包被质量浓度与酶标抗原的稀释倍数、封闭液浓度和包被条件进行了优化，获得最佳反应体系，建立环丙沙星直接竞争ELISA方法。结果显示该方法在0.01ng/mL-1000ng/mL的范围呈现良好线性关系，灵敏度(IC50)为4.17ng/mL，最低检测限(IC15)可以达到5.49×10-2ng/mL。该方法的板内和板间变异系数为5.22％、5.97％。对恩诺沙星的交叉反应率为1.22％，对氧氟沙星、依诺沙星的交叉反应率均小于0.1％，说明该方法的稳定性和特异性较好。选择牛奶、牛肉、虾肉和鱼肉四种样品，研究基质消除方法进行加标试验，测定加标回收率在83.92％-99.26％之间。
建立CIP胶体金免疫层析的方法用于快速定量检测动物性食品中环丙沙星残留。通过紫外、透射电镜和激光粒度分析仪对柠檬酸三钠还原法制备的胶体金溶液进行了表征。同时对金标抗体的pH、蛋白标记量和金标复溶液进行优化，制备了金标抗体。以NC膜为固相载体，CIP-OVA和羊抗兔作为检测线和质控线，并对包被条件、样品垫和检测时间进行优化，采用胶体金试纸分析仪测定信号强度建立标准曲线。检测时间为10分钟，该方法的线性范围为0.78-25ng/mL，检出限为0.75ng/mL。本试验选择鱼肉、牛肉、虾肉和牛奶四种样品进行试验，研究基质消除方法，每个样品进行4个加标标准，回收率在77.47％-89.69％之间。
两种CIP快速检测方法的验证。通过高效液相色谱色谱法对建立的两种方法进行验证，结果表明均有良好的线性关系，并且R2都在0.98以上，说明建立的直接竞争酶联免疫法和胶体金免疫层析法均能满足动物性食品中环丙沙星残留的检测。