论文部分内容阅读
本研究采用了PCR-RFLP、PCR-SSCP、RMAPD、DNA序列分析和微卫星等标记技术分析了西农萨能奶山羊CSN1S2基因、CSN3基因、IGFBP3基因、POU1F1基因、GH基因、FSHR基因的基因座多态及其与经济性状（产奶量、产羔数、初生重、成年体重和体尺指标）的相关性，为奶山羊的改良、开发和利用提供DNA水平的理论依据；同时，还利用PCR-RFLP和PCR-SSCP方法分别检测了西农萨能奶山羊、关中奶山羊、陕南白山羊、安哥拉山羊和布尔山羊5个山羊品种共计175个个体的10个基因座的遗传多态性，为山羊品种资源保护和畜牧业的发展提供资料。本论文通过上述研究首次取得了以下结果：西农萨能奶山羊的PCR-RFLP研究1.1.1 CSN1S2基因:①群体等位基因F/N的频率为0.087/0.913且处于Hardy－Wenberg平衡状态；②西农萨能羊CSN1S2基因座F等位基因与高产奶量呈负相关，如FF基因型个体在平均产奶量、第二胎产奶量上显著或极显著地低于NN型个体(P<0.05，P<0.01)；③作者首次发现CSN1S2基因对产羔数有显著影响(P <0.05)，该基因的产羔效应是由与之连锁FecB基因产生的；FF、NF基因型个体第一胎产羔数较NN型多（P <0.05）；在第四胎产羔数上，NN基因型个体产羔数较NF型和FF型多(P <0.01);④在初生重、体高指标上，NF、FF基因型和NN型间差异显著（P <0.05）。1.1.2 CSN3基因：①CSN3-HaeIII基因座未发现多态性。②CSN3-HindIII和CSN3-TaqI基因位点对产奶量没有显著影响（P >0.05）。③作者第一次证实CSN3、CSN1S2等酪蛋白基因与控制羊产羔数的主效基因FecB连锁，而且它们之间遗传距离很小；CSN3-TaqI位点与FecB位点一样对产羔数有显著影响：AB和BB基因型第一、二胎产羔数均值差异显著或极显著（P <0.05和P <0.01）；CSN3、CSN1S2等酪蛋白基因可作为产羔性状分子标记的有效侯选基因④CSN3基因对初生重和成年体重等指标上有显著差异（P<0.05,P<0.01）。1.1.3 IGFBP3基因：①利用HaeIII、Alw26I、TaqI分析西农萨能羊IGFBP3基因多态性，结果表明均为单态。作者认为山羊IGFBP3基因第299→302位序列没有丢失酶切位点是导致了山羊未出现HaeIII酶切多态性的根本原因。②IGFBP3<WP=8>基因经酶切后表现明显的山羊、绵羊、水牛和普通牛等的物种间多态性。1.1.4 POU1F1基因：69只西农萨能奶山羊和62只关中奶山羊POU1F1基因的HinfI酶切结果表明，在2个山羊品种种未发现多态性。2 西农萨能羊SNP位点多态的PCR-SSCP检测及与经济性状的相关分析①PCR-SSCP检测表明FSHRexon10基因座无基因多态性；GHexonII基因座处于Hardy－Weinberg平衡态状态，GHexonV基因座存在BB型、AC型、AB型和BC型，处于Hardy－Weinberg非平衡态状态。②GHexonII位点与产奶量不相关（P<0.05）；GHexonV位点与产奶量相关，如不同基因型在第三、四、五、六、七胎产奶量和平均产奶量上存在显著差异(P <0.1,P <0.05，P <0.01)。③GHexonII基因座AB型个体第五胎产羔数显著多于BB型个体(P<0.01)，BB型个体第七胎产羔数优于AB型(P <0.05)；GHexonV基因座BC型个体第三胎产羔数分别比AB、AC型个体多0.250只(P <0.1)。④GHexonII和GHexonV 基因位点对体尺指标没有影响(P >.05)。⑤与牛杂合子类型序列进行DNA序列分析，西农萨能奶山羊FSHRexon10基因座杂合子序列第54位（A→G）的转换导致了Gln→His的氨基酸的变化。⑥经DNA序列分析表明：GHexonV基因座存在SNP位点，其分子机理是该基因座位存在11个位点的转换或者颠换等遗传变化。微卫星标记利用2对微卫星引物对萨能羊进行微卫星分析，结果未发现多态性。4. RMAPD与西农萨能奶山羊经济性状的相关性研究①RMAPD（随机微卫星引物扩增多态DNA）标记是一种新型的分子标记。②RMAPD与西农萨能奶山羊经济性状存在一定的相关性：HEL1-2+F09标记、MFW20-1+F09、HEL1-1+F09标记对产奶、产羔性状和初生重、体高等体尺指标均有显著影响（P<0.05）。 5 5山羊品种遗传多态性的PCR-RFLP检测①CSN1S2、CSN3-HindIII、CSN3-TaqI、CSN3-HaeIII、IGFBP3-HaeIII和β-1g等6个基因座的PCR-RFLP检测结果表明：CSN3-HaeIII和IGFBP3-HaeIII基因座未表现多态性，而CSN3-HinfI基因座的A等位基因为稀有基因仅在关中奶山羊中低频率表现；②对6个乳蛋白基因座进行数据分析，得到结果：关中奶山羊的遗传多样性最高，其次是西农萨能奶山羊，陕南白山羊和布尔山羊的遗传多态性最低；6 5山羊品种遗传多态性的PCR-SSCP检测 <WP=9>GHexonII、GHexonV 和FSHRexon10以及CSN3exonIV等4个基因座位的PCR-SSCP检测结果表明：5个山羊品种PIC均值在0.1805-0.3281之间，其中西农萨能奶山羊遗传多态性最丰富，其PIC值最高达到0.3281，其次是关中奶山羊（PIC=0.3000），最低的是安哥拉山羊和布尔山羊（PIC分别为0.1805和0.1875）；