背景：肾癌(Renal Cell Carcinoma，RCC)是最常见的肾脏实质性恶性肿瘤。 树突状细胞在肿瘤免疫中的基础地位确立以来，肾癌的免疫治疗取得了较大的进展。树突状细胞是目前公认的体内功能最强的抗原提呈细胞(antigen presenting cell，APC)，是机体内启动免疫反应的关键因素。DC摄取肿瘤抗原，提呈抗原给T淋巴细胞，诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes，CTL)增殖、活化，产生特异性抗肿瘤细胞免疫。DC与肿瘤关系密切，癌组织中DC的数量是肿瘤预后的重要参数之一，荷瘤宿主体内存在一定数量的DC，但DC的数量、形态、表型异常，免疫能力差，因此，构建一种以DC为基础的瘤苗，对DC进行一定的修饰，以改善肿瘤局部的微环境、增强DC的免疫功能，进而遏制肿瘤免疫逃脱。 本研究首先采用S-100蛋白和CD45RO单克隆抗体分别标记肾癌组织内浸润性DC和T淋巴细胞，分析它们与肾癌临床病理分期和预后的关系，为进一步研究DC瘤苗的免疫治疗提供理论依据。我们从外周血PBMC分离培养DC，将能发挥重要抗肿瘤作用的IL-12基因转染DC，再用肾癌肿瘤粗提抗原致敏DC，构建成一种以DC为基础的瘤苗，使其在有效提呈抗原的同时又持续高分泌IL-12因子，更有效地诱导T淋巴细胞增殖、活化，进而诱导特异性抗肿瘤免疫。从分子及细胞学水平观察DC瘤苗体外诱导自体T淋巴细胞产生特异性抗。肾癌免疫的效能。然后采用人外周血淋巴细胞(hu-PBL)腹腔注射严重免疫缺陷小鼠(NOD／SCID鼠)，在NOD／SCID鼠体内重建人的免疫系统，同时对小鼠皮下接种人肾癌细胞，构建一种模拟人体自发肾癌的动物模型。最后用DC瘤苗免疫治疗这种人化荷瘤NOD／SCID鼠，评价DC瘤苗的体内抑瘤疗效，为进一步的临床研究奠定基础。 目的： 1.第一部分：肾癌组织内树突状细胞和淋巴细胞浸润的检测及其临床意义探讨肾癌组织内浸润性DC和T淋巴细胞的浸润情况，评价其对肾癌临床病理分期与预后的价值。 2.第二部分：树突状细胞的体外扩增培养掌握从外周血单个核细胞(PBMC)中分离培养’DC的方法。 3.第三部分：以树突状细胞为基础的DC瘤苗的制备联合用肿瘤抗原致敏和IL-12基因修饰方法，构建一种以DC为基础的DC瘤苗，并从分子水平上检测该瘤苗的免疫状态。 4.第四部分：DC瘤苗诱导抗肾癌免疫的体外实验在体外用DC瘤苗诱导T淋巴细胞增殖、活化，从细胞水平上评价DC瘤苗的免疫效能。 5.第五部分：NOD／SCID鼠人免疫系统重建及荷人肾细胞癌嵌合模型的建立构建一种模拟人体自发肾癌的理想实验小鼠模型。 6.第六部分：DC瘤苗免疫治疗人化荷肾细胞癌NOD／SCID鼠的体内实验研究用DC瘤苗免疫治疗人化荷肾细胞癌NOD／SCID鼠，评价其体内抑瘤疗效。 结论： 1.第一部分：肾癌组织内树突状细胞和淋巴细胞浸润的检测及其临床意义肾癌组织内S-100+DC细胞数与CD45RO+T淋巴细胞浸润情况不是肾癌临床病理分期及预后的独立因素；肾癌组织内同时有足够数量和质量的S-100+DC细胞以及CD45RO+T淋巴细胞浸润才是肾癌临床病理分期及预后的有利因素。 2.第二部分：树突状细胞的体外扩增培养从PBMC分离培养可以得到形态典型、高纯度和高数量的DC，但DC仍处于未成熟状态，提示要使DC发挥更好的功能，对DC进行致敏修饰等处理是必要的。 3.第三部分：以树突状细胞为基础的DC瘤苗的制备逆转录病毒载体携带IL-12基因修饰和肿瘤粗提抗原致敏方法可以制备免疫状态良好的DC瘤苗；“DC-IL-12+Ag瘤苗”能高分泌IL-12和IFN-γ，优化了抗原提呈的微环境。 4.第四部分：DC瘤苗诱导抗肾癌免疫的体外实验“DC-IL-12+Ag瘤苗”能明显诱导、促进T淋巴细胞增殖；能有效地诱导T淋巴细胞活化，促进CTL分泌高水平的IFN-γ因子，抑制CTL分泌IL-10免疫抑制因子，优化了T细胞微环境，在体外能诱导强大的抗肿瘤免疫。 5.第五部分：NOD／SCID鼠人免疫系统重建及荷人肾细胞癌嵌合模型的建立hu-PBL腹腔注射NOD／SCID鼠可以在小鼠体内成功重建人的免疫系统，并维持在一定的水平。 人化NOD／SCID小鼠皮下接种人肾癌细胞成瘤率高，可以成功构建人化荷肾细胞癌嵌合模型，该嵌合模型良好模拟了人体自发肾癌的情形，是一种理想的免疫治疗实验小鼠模型。 6.第六部分：DC瘤苗免疫治疗人化荷肾细胞癌NOD／SCID鼠的体内实验研究DC瘤苗免疫治疗人化荷肾细胞癌NOD／SCID鼠抑瘤效果明显，免疫治疗疗程约为7～14d，个别实验小鼠出现轻度腹泻副反应。