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随着我国城乡经济的发展与人民生活水平的提高,食品的数量与种类日益丰富,如何提高食品的质量与安全性的问题日益突出。在食品加工、贮存、运输、销售、直到食用的整个过程中,每一个环节都有可能受到生物污染,危害人体健康。据国内外统计,在各种食物中毒中,以细菌性食物中毒最多。其中沙门氏菌和大肠杆菌是细菌性食物中毒中最常见的致病菌,且对人体危害很大。因此,食品工业急需一种快速简便的分析方法,以对食品中的微生物污染物,如大肠杆菌和沙门氏菌进行检测。为保证检测的准确性,本文将亲和素—生物素系统用于表面等离子体共振(SPR)生物传感器,而且使用的亲和素NeutrAvidin 可以最大限度的降低非特异性吸附,BSA 做为非专一性吸附杂质的抑制剂,能联结抗体抗原、受体蛋白,做亲和吸附剂中的手臂(arm),保证了检测的准确性。为了提高检测的灵敏度,采用一次抗体-抗原-二次抗体夹心式方法检测。引入胶体纳米金技术,将胶体金标记的抗体作为二次抗体,进一步放大检测信号。将这些方法结合使用,用于快速检测大肠杆菌E.Coli O157:H7 和沙门氏菌,扩展了表面等离子体共振(SPR)生物传感器对微生物的检测限,并实现了快速检测。本文通过实验得出以下结论: 1. 使用的表面等离子体共振(SPR)生物传感器使用了亲和素-生物素系统后,可以检测到的大肠杆菌E.Coli O157:H7 的浓度是106cfu/ml。2. 采用胶体金标记的生物素化抗体作为二次抗体,利用这种办法显著提高了检测限,与生物素-亲和素系统结合使用,将SPR 传感器对大肠杆菌E.Coli O157:H7 的检测范围从106cfu/ml 提高到了101cfu/ml,检测时间少于一小时。3. 要想得到较大的测试值需要较长的测试时间,至少要3000 秒以上才好。因此胶体金复合二次抗体与菌液的结合时间选择为20min。4. 在胶体金复合二次抗体结合以后使用LB 清洗,得到的折射率值不仅将整体数值提高,而且使每点的测试值增大,这说明胶体金复合二次抗体结合以后使用LB 清洗是有利的,有益于对微生物的检测。5.采用Mey 氏稳定化试验,通过观察颜色来确定稳定胶体金的大肠杆菌E.Coli O157:H7 抗体量和鼠伤寒沙门氏菌的最适值是18μg/ml。