朝鲜蓟天然活性成分的提取、分离及其生物活性研究

来源 :中国科学院生态环境研究中心 | 被引量 : 0次 | 上传用户:buebuewong
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将朝鲜蓟叶和花苞通过75%乙醇索氏提取后,经萃取、浓缩、大孔吸附树脂吸附、解吸以及反复SephadexLH-20柱层析、硅胶柱层析分离和高压液相制备柱分离,分别得到八种和六种不同的活性化合物。 通过ESI-MS、MS/MS、IR、UV和2DNMR分析确定了四种二咖啡酰奎宁酸同分异构体,分别为:氯原酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸和4,5-二咖啡酰奎宁酸;和四种黄酮类化合物,分别为:木犀草素-7-芸香糖甙、木犀草素-7-葡萄糖甙、芹菜素-7-芸香糖甙和芹菜素-7-葡萄糖甙。其中木犀草素-7-芸香糖甙和木犀草素-7-葡萄糖甙是首次在朝鲜蓟叶提取物中得到,芹菜素-7-葡萄糖甙是首次在朝鲜蓟花苞中得到。- 抗氧化活性分析表明:朝鲜蓟叶提取物以及正丁醇萃取液的抗氧化活性最高。建立了对朝鲜蓟提取物萃取液的在线液相色谱—抗氧化活性分析方法(onlineHPLC-DPPH·),该方法分析表明:以上八种化合物都具有抗氧化活性。其中三种咖啡酰奎宁酸类衍生物的抗氧化活性最强;而氯原酸和四种黄酮类化合物的抗氧化活性则相对较低。并且这八种活性成分的抗氧化活性均高于常用化学合成和天然抗氧化剂,分别是Vc的1.2~7倍、特丁基对苯二酚的2~10倍。进一步分析朝鲜蓟抗氧化活性和总酚含量的关系,表明:朝鲜蓟的抗氧化活性与总酚含量呈正相关关系。 朝鲜蓟提取物及其活性成分对细菌、酵母菌和霉菌等三大类微生物都有抑制作用,而其中以叶子提取物和正丁醇萃取液的抑制性最强,而八种活性成分中的大多数化合物对所测菌株具有很强的抑菌活性,最低抑菌浓度在50~200μg/mL之间,其中氯原酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、木犀草素-7-芸香糖甙和木犀草素-7-葡萄糖甙几乎对所有被测菌株都有较高的抑制活性。此外,所有化合物抑制真菌的效果明显强于细菌。 首次提出了对朝鲜蓟提取物及其活性成分的抗肿瘤活性及其相关机制的研究,尤其是二咖啡酰奎宁酸衍生物的抗肿瘤活性研究。朝鲜蓟提取物对三种供试肿瘤细胞株的IC50测定表明:对HL-60细胞和Bel-7402细胞具有较好的抗肿瘤活性。各活性成分中,四种咖啡奎宁酸类化合物对HL-60细胞具有较强的抗肿瘤作用,其中1,3-二咖啡酰奎宁酸的作用最强;而黄酮类化合物具有更强的抗肿瘤作用。 流式细胞实验对加药前后的细胞周期和凋亡细胞DNA特异性荧光染色的变化分析表明:朝鲜蓟提取物对Bel-7402细胞的作用机制基本不是通过凋亡途径,而是通过抑制细胞增殖途径达到抗肿瘤作用;对HL-60细胞的作用机制基本是通过抑制细胞增殖途径,且有少量通过凋亡途径而达到杀灭肿瘤细胞的作用。此结果通过对它们的DNA梯状条带检测分析得到了进一步的补充证实。朝鲜蓟提取物对大鼠骨髓细胞的毒性试验和体内动物试验结果表明:朝鲜蓟提取物对正常细胞和组织未见明显毒性。
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