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已烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)属于人工合成的雌激素,在人和动物体内会产生雌激素样效应.在养殖业中,DES能够显著促进动物的生长,提高饲料转化率,但由于DES对人体的致癌和致畸作用,世界各国均规定食品动物养殖中不得以任何途径和方式使用DES,动物及动物性食品中不得检出DES.DES残留免疫分析是DES残留监控中的重要手段之一.该研究属于DES残留免疫检测试剂盒研制的前期工作内容,也是必不可少的研究.研究取得如下结果:1.在室温条件下,将DES与丁二酸酐按一定比例溶解于无水吡啶中,搅拌反应生成棕黄色物质,将其分离纯化后对其进行高分辨质谱、红外光谱、核磁共振碳谱及氢谱等鉴定,试验结果表明,该棕黄色物质分子量为368,分子式为C22H2405,含有酚羟基、羧基等关键基团,为所要制备的DES衍生物已烯雌酚半琥珀酸(DES-HS).2.利用混合酸酐法将DES-HS与载体蛋白(BSA,OVA)进行偶联得到DES人工抗原.合成的人工抗原经紫外扫描、SDS-PAGE凝胶电泳鉴定证明DES-HS与载体蛋白偶联成功;并用UVP Bioimaging system中的labworks 4.0 ImageAcquisition and Analysis software分析估算BSA与DES-HS的偶联率为1:30~32.OVA与DES-HS的偶联率为1:25~28.3.用合成的DES-HS-BSA结合物分别免疫家兔和Balb/c小鼠,采集免疫动物血清.应用琼脂双扩散试验和间接ELISA试验、阻断ELISA检测特异性DES抗体的产生,抗体效价及其与游离DES反应的特异性.结果表明:无论免疫兔还是免疫小鼠,其免疫血清均能够与DES-HS-OVA上的DES决定簇发生特异性结合反应;免疫兔血清效价不低于1:6000,免疫小鼠血清效价不低于1:12000;兔免疫血清能够与游离DES发生特异性反应.通过上述研究和分析,可得出如下的结论:建立了DES-HS制备方法;成功地制备出了DES的人工抗原;用DES-HS-BSA分别免疫兔和小鼠制备出了抗DES免疫血清;建立了DES抗体的间接ELISA检测方法.该研究为研制DES单克隆抗体及拥有中国自主知识产权的DES残留免疫检测试剂盒奠定了基础.