论文部分内容阅读
雄性不育是高等植物的一种普遍生物学现象。温度敏感型雄性不育是植物杂种优势利用的一种重要遗传工具,其不育基因的表达受自身遗传背景和外界环境条件的共同影响,是一个多步骤、多因素参与的复杂过程。温度敏感油菜雄性不育在油菜杂交育种中具有重要的利用价值,但是目前在油菜温敏雄性不育系的形态学和生理生化等方面的研究报道较少,我们对温度敏感型雄性不育系160S育性转换时期的花器官形态和花蕾可溶性蛋白等进行了研究。通过对160S、YB、HC8,以及160S×HC8杂交F1代的花器官形态研究发现,160S×HC8的花瓣最大,HC8的花瓣较大而160S的花瓣最小;花药与花丝的长度比较上来看,160S的比值最小即花药占雄蕊的比例最小;HC8、YB和160S×HC8F1代的花药非常饱满,花粉充足颜色艳丽,花粉育性稳定且始终保持在较高的水平;160S的花药略小,花粉略少,花粉育性在低温时与160S×HC8的育性十分接近,但在温度升高的过程中,花粉育性随温度的升高而急剧下降,最终达到不育。所有的生物体在正常的代谢过程中都可以产生一系列的活性氧自由基(Reactive oxygen species, ROS),其中包括超氧化物(O2),过氧化氢(H2O2),羟自由基(·OH)。丙二醛(MDA)是一个广泛应用的脂质氧化损伤的标记,在受到生物和非生物逆境时它的浓度会发生变化。除了像抗坏血酸和谷胱甘肽这样的抗氧化物外,还有ROS清除酶,比如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)。通过对油菜160S在育性转换期花药的保护酶活性和MDA含量的研究发现:在低于27℃时160S花药的MDA含量含量虽有升高,但是不明显,而在33℃时其含量大幅度升高,而对比正常可育的31C品系花药MDA含量则变化不明显,与160S形成鲜明对比;当温度低于27℃时,160S花药的SOD、CAT、POD和APX的活性随着温度的升高而升高,这与正常品系31C的保护酶活性变化趋势相同;而在33℃时,160S花药的保护酶活性大幅度降低,而31C的保护酶活性依然很高。对160S和正常油菜31C花蕾四个阶段的可溶性蛋白研究发现,与正常油菜31C相比,在可溶性蛋白浓度上并没有显著性差异;而在可溶性蛋白种类方面,SDS-PAGE结果显示160S较31C缺少了四个条带,这很有可能是导致160S花药退化和花粉不育的原因。在植物的补救代谢途径中,腺嘌呤磷酸核糖转移酶(APRT, EC2.4.2.7)在将腺嘌呤转化成腺苷酸-5-单磷酸(AMP)的过程中发挥着重要的作用。本研究对温敏型雄性不育油菜160S的腺嘌呤磷酸核糖转移酶(adenine phosphoribosyltransferase, APRT)进行了克隆,得到了其部分DNA片段,长度约为1400bp。在NCBI中blast发现,其与拟南芥和油菜的部分APRT (GenBank:AY324112.1)序列的匹配率分别为96%和98%。