我国是世界水禽生产大国,年饲养量近50亿只,其中鸭饲养量近43亿只。随着养殖业向规模化、集约化方向的发展,鸭病的发生呈上升趋势,且存在多种疫病病原之间混合感染的现象,多病原混合感染导致鸭群的发病率和死亡率上升。鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）是引起鸭、鹅等水禽急性败血性传染病的一种疱疹病毒;鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒（Tembusu virus,TMUV）引起的以产蛋鸭产蛋量骤降和雏鸭或育成鸭出现神经症状为主要特征的一种新型急性传染病。鸭瘟和鸭坦布苏病毒病是鸭的两种主要疫病,能给养鸭业造成较大的经济损失,而且这两种疫病常常呈现混发或继发,因此研制鸭瘟、鸭坦布苏病毒病二联苗是养殖鸭从业者所亟需。然而,国内至今尚无鸭瘟、鸭坦布苏二联灭活苗生产销售,鸭瘟、鸭坦布苏二联灭活苗的研制,1次免疫可有效预防和控制鸭瘟和鸭坦布苏2种疫病的发生和流行,简化免疫程序,减轻免疫接种的工作量,省时、节约成本,减少免疫次数避免因频繁免疫所造成的免疫麻痹,减少了对鸭群的应激。本研究利用实验室现有的鸭瘟、鸭坦布苏种毒,制备了鸭瘟、鸭坦布苏二联灭活疫苗,并对疫苗相关工艺进行了摸索。具体研究内容如下:1.制苗用病毒液的培养工艺及灭活工艺研究通过相应种毒在鸭胚培养增殖试验,对比不同种毒稀释度、不同鸭胚日龄、不同接种途径和不同收胚时间对病毒增殖的影响。结果表明:将鸭瘟或鸭坦布苏毒种用灭菌生理盐水作50～100倍稀释、经尿囊腔接种9～10日龄易感鸭胚进行病毒液繁殖,在96 h收集48～96 h死亡鸭胚及存活鸭胚的尿囊液,能使尿囊液的收获量和病毒含量达到最高。对收获后的病毒液,进行了抗原浓缩工艺研究,结果表明:采用切向流超滤系统,选择截留分子量为50 k Da膜包对收获的两种病毒液分别进行了2倍浓缩,对浓缩前后的病毒液分别进行毒价测定。测定结果表明:浓缩后病毒毒价的上升倍数与浓缩的比例基本上是平行的。浓缩废液中不含有活病毒,应用超滤浓缩装置对病毒液进行浓缩的工艺是可行的。开展了抗原灭活工艺研究,在不同甲醛溶液浓度、不同时间及不同温度条件下对比病毒液的灭活效果,结果表明:使用0.2%甲醛溶液在37℃条件下灭活18 h,可保证病毒完全灭活。制苗用抗原的相容性研究,采用同批抗原、同样的抗原量和剂型制备的鸭瘟灭活疫苗单苗和鸭坦布苏灭活疫苗单苗进行了性状检验、无菌检验、安全检验、效力检验、甲醛和硫柳汞残留量测定。结果显示,二联苗与单苗的性状检验、无菌检验、安全检验、甲醛和硫柳汞残留量均符合规定;效力检验中表明,二联苗制苗用鸭瘟抗原和鸭坦布苏抗原之间没有明显的相互干扰现象,两种抗原相容性良好。2.开展了疫苗最小免疫剂量测定、疫苗效力试验及疫苗安全性试验研究取实验室制备的鸭瘟、鸭坦布苏二联灭活疫苗分别以每只0.13 m L、0.25 m L和0.5 m L的剂量,经皮下途径免疫90日龄健康麻鸭,免疫后21日进行效力检验。综合试验结果表明:二联苗的最小免疫剂量为0.25 m L,使用剂量为0.5 m L。疫苗的效力试验结果表明:鸭瘟、鸭坦布苏二联灭活疫苗的免疫途径可为皮下或肌肉注射;雏鸭1次免疫后14 d,以同样剂量加强免疫1次;易感成鸭一次免疫即可达到良好的保护效果。使用实验室试制的鸭瘟、鸭坦布苏二联灭活疫苗,分别以一次单剂量、单剂量重复和一次超剂量经颈背部皮下和腿部肌肉两种途径接种10日龄麻鸭和90日龄麻鸭,结果表明:该疫苗对不同日龄的鸭安全性良好。