miR-210在胰腺癌细胞株中的表达分析及作用机制研究

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目的:检测miR-210在人胰腺癌细胞株中低氧及正常环境下的表达,并探索miR-210在人胰腺癌细胞株中的作用机制。方法:以real-time PCR检测人胰腺癌细胞株中miR-210在低氧及正常情况下的表达差异;此后以siRNA方法干扰HIF-1α,观察其对低氧环境诱导miR-210高表达的影响;最后利用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因检测系统,寻找miR-210在人胰腺癌细胞株中的靶基因。结果:miR-210在8株人胰腺癌细胞株中低氧环境下的表达水平均高于正常;其中在AsPC-1、BxPC-3、 MIAPaCa-2、PANC-1、Su86.86、SW1990中各自在正常及低氧环境下的表达水平具有统计学差异(P<0.05);将这8株细胞分为正常环境培养组和低氧环境培养组,低氧组的miR-210表达量高于正常组,且具有统计学差异。此后在PANC-1细胞株中以siRNA方法干扰HIF-1α后,在正常环境下,实验组与对照组细胞的miR-210表达水平无明显差异;而在低氧环境下,转染siHIF-1α的细胞的miR-210表达水平则明显低于对照组。最后,用生物信息学方法从TargetScan、PicTar、Miranda三个预测软件中筛选出7个miR-210的候选靶基因,并在PANC-1细胞株中进行双荧光素酶报告基因检测,结果显示其中E2F3、EFNA3、EGR3、GIT2、MNT、ZNF462这6个基因野生型的相对荧光值低于突变型,且具有统计学差异。结论:低氧环境可以诱导miR-210在胰腺癌细胞株中的高表达,且这一过程是HIF-1α依赖的。同时,E2F3、 EFNA3、EGR3、GIT2、MNT、ZNF462这6个基因在人胰腺癌细胞株中受到miR-210的直接调控,是miR-210的靶基因。
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