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目的:人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)是一种引起人类皮肤、粘膜的乳头状瘤或疣,并可导致恶性病变的病原体.研究表明,90％宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒感染有关.近年的流行病学研究显示,人乳头瘤病毒58型(HPV58)在中国妇女宫颈癌标本中检出阳性率非常高,尤其是东南省份,HPV58型的感染有上升趋势,与HPV16型的检出率相近,同时二者在宫颈各病变组的检出强度趋势基本一致.由此可见,在中国HPV58型是仅次于HPV16型、18型的高危型别,与宫颈癌发生关系密切.目前,国内外对HPV16型、18型已做了大量工作,而对HPV58型的研究却较少.基于HPV58型在中国妇女宫颈癌中的特殊位置,该研究克隆并构建了HPV58L1基因的重组表达载体,并利用原核细胞表达HPV58L1主要衣壳蛋白,为研制HPV58型基因工程疫苗打下基础.方法:从该室保存的HPV58型DNA中扩增完整的L1基因片段,克隆至pUC19质粒中并测序.测序结果正确后,从pUC19-HPV58L1上切下目的基因片段L1,克隆到表达载体pQE30上,构建重组表达载体pQE30-HPV58L1,酶切鉴定重组质粒的正确性.然后转化工程菌M15(pREP4),经IPTG诱导后,表达HPV58L1蛋白,利用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.结果:PCR扩增产物大小约1.6Kb,与预期结果相同.重组质粒pUC19-HPV58L1插入片段L1基因核苷酸序列的测定结果,与文献报道相一致.经酶切鉴定证实,重组表达载体pQE30-HPV58L1构建成功.重组工程菌经诱导表达的蛋白以包涵体形式存在,经SDS-PAGE检测在相对分子量约58KD处有特异的蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的26％.Western blot证实了表达蛋白的特异性.结论:该实验成功克隆并构建了HPV58L1基因的重组表达载体,有效表达了HPV58LV主要衣壳蛋白,并利用SDS-PAGE、Western blot方法进行了鉴定.为下一步进行HPV58L1蛋白纯化及蛋白复性,进行VLPs装配及制备相应抗体,进而研制HPV58基因工程疫苗及HPV多价疫苗奠定了物质基础.