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人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）是一种破坏人类免疫系统的逆转录病毒,导致免疫系统功能缺陷,进一步发展为艾滋病（Acquired Immunodeficiency Syndrom,AIDS）,并在全球范围内广泛流行,对人类的生命健康和社会公共安全造成了严重威胁,针对HIV不同靶点的抗艾滋病新药研发仍是亟待解决的问题。藏药具有丰富的植物资源种类,但化学和药理相关研究较少,目前还未见抗HIV活性报道。本课题在前期研究基础上,通过体外药效学实验对8种藏药提取物进行了抗HIV-1病毒活性的系统评价和作用机制初步分析。首先采用CCK-8细胞增殖实验和假病毒感染模型对8种藏药乙醇提取物的体外抗病毒活性进行系统初筛,结果发现木藤蓼、野棉花、黑心虎耳草、西北沼萎陵菜、柳兰醇提物对HIV-1病毒的半数抑制浓度(IC50)分别为6.47±0.78、11.97±1.09、11.70±0.79、6.53±1.01、4.00±0.88μg/Ml,表现良好的抗病毒活性。表面等离子共振（Surface Plasmon Resonance,SPR）传感器检测发现野棉花、黑心虎耳草与整合酶蛋白、野棉花醇提物与Vpu蛋白、野棉花、黑心虎耳草和柳兰65%乙醇提取部位与Vif蛋白、木藤蓼醇提物与gp41蛋白具有良好的亲和力;体外逆转录酶、整合酶和蛋白酶活性抑制实验发现木藤蓼、野棉花、黑心虎耳草对Sso7d-IN整合酶活性具有显著的抑制作用,IC50分别为27.08、36.77、42.93μg/mL。在此基础上,对西北沼萎陵菜和柳兰开展进一步的研究,分别制备石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水提取部位。体外假病毒感染模型检测发现西北沼萎陵菜乙酸乙酯、正丁醇和水提取部位对HIV-1假病毒的IC50分别为为4.13±0.46、2.30±0.62、2.97±0.53μg/mL,柳兰乙酸乙酯、石油醚、正丁醇、水提取部位对HIV-1假病毒的IC50为1.48±0.13、3.09±0.57、6.5±0.82、1.14±0.02μg/mL。HIV-1 R3A野生病毒感染实验结果显示柳兰水提取部位对野生病毒的感染具有良好的抑制作用,P24抗原检测和荧光素酶测得IC50为16.09、10.56μg/mL。SPR传感器检测发现西北沼萎陵菜和柳兰提取物均与与整合酶具有良好的体外结合亲和力,此外,柳兰提取物与Vif蛋白也有结合。体外逆转录酶、整合酶、蛋白酶活性检测实验和Western blot等实验证实西北沼萎陵菜正丁醇提取部位和柳兰水提取部位对Sso7d-IN整合酶活性具有显著的抑制作用,抑制率分别为95.87%、84.54%,柳兰水提取物对蛋白酶具有显著抑制作用,抑制率为79.71%,此外,柳兰水提取部位下调Vif蛋白的表达。实验结果表明,木藤蓼、野棉花、黑心虎耳草、西北沼萎陵菜与柳兰具有剂量依赖性的抗病毒作用。其中,柳兰水提取部位对HIV-1假病毒和野生株具有良好的体外抑制活性,且细胞毒性小。其作用机制可能与抑制整合酶3’加工和下调Vif蛋白的表达有关。该研究将为藏药的研究和抗病毒新药开发提供实验依据和基础。