蛋白激酶C受体l(receptor for activated C kinase 1,RACKl)是WD40家族的成员,它不仅可以做为稳定蛋白激酶C(protein kinases C,PKC)的受体,可以在多个信号转导通路中起到重要的调控作用。而且还可以通过和其他蛋白相结合,协同调节细胞内的各项生理活动。本实验通过特异性引物的设计,在PCR克隆,测序,获得柞蚕蛋白激酶C受体1基因的正确读码框序列。测得该基因读码框全长为960 bp,对319个氨基酸进行编码。对其蛋白分子量预测为35.88 kDa。通过构建系统进化树,柞蚕RACK1氨基酸序列与小菜蛾等鳞翅目昆虫的同源性较高,普遍在95%以上。将克隆所得目的片段与质粒pET-28a表达载体相连接,得重组质粒pET-28a-RACK1,将其转化入感受态细胞BL21(DE3)中,对蛋白采用不同浓度的IPTG诱导表达。经蛋白电泳和蛋白免疫印迹分析表明,所需目的蛋白得到正确诱导的表达,分子量大小在36 kDa左右。重组蛋白进行纯化用本实验室Ni-NTA亲和层析柱。并且用纯化的蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。抗体效价经ELISA检测,达到1:20000。提取柞蚕卵、幼虫,蛹、成虫四个阶段对RACK1进行时序表达分析,结果表明在四个时期均有表达,表达情况不一,成虫期表达量相对较高,卵期较低。分别提取柞蚕幼虫五龄第三天的脂肪体,马氏管,血液,中肠,表皮5个不同组织的总RNA和总蛋白,分析柞蚕RACK1在不同组织中的表达情况。实验结果表明柞蚕RACK1在所取五种组织中均有表达,表达量相对较高在脂肪体和马氏管中。选取五龄第三天的柞蚕幼虫,分别注射核型多角体病毒(病毒),白僵菌(真菌),大肠杆菌(细菌)三种病原微生物进行免疫刺激,并提取1.5,3,6,12,24,48 h六个时间点脂肪体和马氏管的RNA和总蛋白。通过荧光定量和蛋白免疫印迹法分析柞蚕RACK1经过免疫刺激后,在不同的时间点表达量的变化。通过对柞蚕进行病原微生物刺激,RACK1表达量上调且变化情况不一,注射大肠杆菌变化最为明显,12h后RACK1表达量显著升高在24 h达到最高,但在48 h显著降低,注射白僵菌和NPV相对变化较小,在24 h-48 h有所升高。表明RACK1可能参与到了柞蚕对外源病原微生物的免疫反应中。柞蚕是大蚕蛾科,做为一种重要的经济绢丝昆虫,在食品和药用方面都有经济价值。对天然柞蚕开展免疫研究,对于提高柞蚕的抗病能力,为保障养蚕业的健康持续发展具有重要的意义。