细胞凋亡在生物学上有着重大意义,而凋亡蛋白酶活化因子-1(Apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)在细胞凋亡过程中发挥着重要作用。在哺乳动物细胞中,Apaf-1与细胞色素C,procaspase-9共同形成凋亡体,介导caspase级联反应,Apaf-1在线粒体凋亡通路中具有引擎作用。但在鳞翅目昆虫中,Apaf-1的功能还未确定。我们实验室从斜纹夜蛾细胞中鉴定了一种新的Apaf-1,Sl-Apaf-1。与哺乳动物Apaf-1相似,Sl-Apaf-1也含有3个结构域,分别为CARD,NOD和WD结构域。本研究初步研究了 Sl-Apaf-1在斜纹夜蛾细胞凋亡通路中的作用。根据已有的Apaf-1序列,对Sl-Apaf-1蛋白的功能进行了研究。首先我们设计了 siRNA,进行RNA干扰实验。在qRT-PCR验证干扰效率的基础上,采用放线菌素D诱导细胞凋亡,流式细胞术检测沉默Sl-Apaf-1表达对细胞凋亡的影响。实验结果表明,Sl-Apaf-1的表达量下调会显著抑制细胞凋亡,降低细胞凋亡率。其次,我们将Apaf-1克隆入真核质粒pIE2-EGFP-N1,转染TH细胞进行过表达实验,检测Sl-Apaf-1过表达对细胞凋亡的影响。结果表明,Sl-Apaf-1蛋白表达量增加,在诱导因子存在的情况下将会明显提高细胞凋亡率;但在没有诱导因子的情况下,Apaf-1的表达量升高,对细胞凋亡水平没有明显影响。所以,可以初步断定,Sl-Apaf-1对斜纹夜蛾细胞凋亡过程有着重要影响,但并不诱导细胞凋亡。双翅目昆虫果蝇细胞凋亡的研究业已证明,其Apaf-1类似物Dark作用方式与哺乳Apaf-1不同,Apaf-1形成无细胞色素C的凋亡体,Apaf-1介导凋亡信号转导并不需要辅助因子细胞色素C的协助。但由于鳞翅目昆虫细胞凋亡过程中存在细胞色素C的释放事件。因此,本研究探讨了 Sl-Apaf-1与细胞色素C的关系。我们进行了 Apaf-1与Cyto C的共定位实验和双分子荧光互补实验检测两者间的相互作用。实验结果显示,Sl-Apaf-1与细胞色素C共定位于细胞质中;双分子荧光互补实验检测到两者间发生相互作用,这些资料提供了清晰有力的证据,证明Sl-Apaf-1与果蝇中的Dark不同,它能够在体内与细胞色素C结合,并影响细胞凋亡,Sl-Apaf-1的作用是依赖细胞色素C的。因此,我们认为,Sl-Apaf-1参与细胞凋亡,并在细胞凋亡通路中发挥重要作用,同时,它能与细胞色素C相互作用,介导凋亡信号的传递。这些研究为深入鳞翅目昆虫细胞凋亡的分子机制研究奠定了一定基础。