1.背景全球范围内,脑血管疾病每年影响近1500万人,给社会带来巨大负担。在我国,脑血管疾病致死率已经超过心血管疾病,成为继恶性肿瘤后的第二致死原因,因此,脑血管疾病的预防和治疗将对世界卫生状况产生巨大影响。急性脑梗死属于西医缺血性脑血管疾病范畴,脑梗死是指因脑供血障碍使局部脑组织缺血、缺氧造成软化坏死。它的急性期多指从发病至病后一周,涉及到较复杂的病理生理机制,包括兴奋性中毒、离子稳态破坏、氧自由基损伤、炎症反应、血脑屏障破坏以及细胞凋亡等机制。脑缺血后细胞死亡主要表现为坏死和凋亡两种形式,随着对脑缺血病理生理学机制研究的不断深入,脑组织细胞凋亡参与缺血性脑血管病的作用受到越来越多的重视。急性脑梗死的病灶包括中心的梗死灶和周围的缺血半暗带,梗死灶的细胞以坏死为主,缺血半暗带的细胞以凋亡为主。本课题组前期的实验中研究了与血管新生相关的因子VEGF,发现通心络超微粉能使VEGF的表达趋于稳定,有助于抑制炎症的发展并促进半暗带区的血管新生。VEGF在神经系统中的作用是由包括磷脂酰肌醇激酶(PI3K)依赖活化的丝/苏氨酸激酶Akt(又名PKB)在内的抗凋亡途径介导,研究提示PI3K/Akt信号通路在缺血性脑血管病的发病机制中起非常重要的作用,然而通心络是否能通过该通路抑制脑组织细胞凋亡而发挥脑保护作用,目前相关报道较少见。本研究旨在通过建立大鼠大脑中动脉栓塞模型,应用特异性抑制剂LY294002阻断PI3K/Akt信号通路,研究急性脑梗死后大鼠脑组织细胞PI3K/Akt信号通路中PI3K、磷酸化Akt、Bad表达的变化,探讨PI3K/Akt/Bad信号通路在急性脑梗死中的调控作用以及通心络超微粉对其干预作用。2.目的1)明确通心络对急性脑梗死大鼠的脑保护作用2)阐明通心络通过PI3K/Akt通路抗凋亡的机制3.方法采用线栓法建立大鼠MCAO模型,将大鼠分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、丁苯酞组(DBT组)、通心络组(TXL组)、通心络+抑制剂LY294002组(TXL+LY294002组),各设两个时间点,分别为脑缺血后1天和3天。TXL组和TXL+LY294002组的大鼠按0.8g/(kg·d)的超微粉通心络灌胃给药,丁苯酞组大鼠按0.28mL/(kg·d)的丁苯酞灌胃给药,假手术组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃。各组于术后6 h灌胃给药,然后于每日相同时间点重复灌胃。1)应用神经功能评分的方法观察大鼠神经功能的恢复情况;2)应用TTC染色法计算脑梗死体积比来评价大鼠脑组织的损伤程度;3)应用HE染色法在光镜下观察大鼠脑组织的一般形态;4)应用TUNEL染色法检测脑梗死血管内皮细胞凋亡程度;5)应用免疫组织化学方法和蛋白免疫印迹方法,观察大鼠脑组织中PI3K、p-Akt、Bad等相关蛋白的表达情况;6)观察中成药通心络超微粉对以上各环节的影响。4.结果1)神经功能评分结果显示,脑缺血损伤可导致大鼠神经功能障碍,通心络可提高神经功能评分,改善受损的神经功能,其作用可被PI3K/Akt信号通路阻断剂所阻断。2)脑梗死体积百分比和HE染色结果显示,通心络可减轻大鼠局灶性缺血损伤后脑组织损伤。3)TUNEL染色结果显示,通心络能够使急性脑梗死大鼠脑组织半暗带区细胞凋亡减少,从而减轻脑损伤,其作用可被PI3K/Akt信号通路阻断剂所阻断。4)免疫组织化学结果显示,通心络能一定程度地提高急性脑梗死大鼠脑组织缺血半暗带区PI3K、p-Akt的表达,并能抑制PI3K/Akt通路下游的促凋亡蛋白Bad的表达。5)蛋白免疫印迹结果显示,通心络能增加急性脑梗死大鼠脑组织缺血半暗带区微血管内皮细胞中PI3K、p-Akt的表达,并能降低急性脑梗死大鼠脑组织缺血半暗带区微血管内皮细胞中促凋亡蛋白Bad等的表达,以上作用均可被PI3K/Akt信号通路阻断剂所阻断。5.结论1)大鼠急性脑梗死后缺血侧脑组织明显受损,通心络对急性脑梗死后大鼠神经功能和形态的恢复有一定的促进作用;2)通心络可通过激活PI3K/Akt信号通路,促进Akt的磷酸化,从而抑制促凋亡蛋白Bad的表达,减少急性脑梗死大鼠脑组织缺血半暗带区脑组织细胞的凋亡,发挥脑保护作用。