论文部分内容阅读
目的: 人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)与肿瘤的发生、发展密切相关,HLA-Ⅰ类分子表达下调可使肿瘤细胞逃避细胞毒性T细胞的免疫识别,而非经典HLA-Ⅰ类分子(HLA-E、G、F)作为免疫耐受分子,亦可帮助肿瘤细胞逃避机体免疫细胞(T淋巴细胞)的识别与杀伤。HLA-F是新近发现的第三种非经典HLA-Ⅰ类分子,其功能及临床研究刚刚起步。本研究通过检测肝癌患者组织中HLA-F的表达情况,分析其与临床病理因素及预后的相关性,探讨HLA-F在肝癌发生、发展中的作用机制及其相关临床意义,为肝癌的早期诊断和预后判断寻找新的标记物。 方法: 1.标本收集 收集2005年9月至2011年1月在医院接受手术治疗的115例肝细胞癌患者,其中男性90例,女性患者25例,中位年龄为53岁(12岁至74岁,)患者术前均未接受放化疗或其他任何药物干预。采集115例肝癌癌灶组织作为实验组,以及66例相应邻近正常肝脏组织为对照组。所有人体标本的研究均事先获得相关伦理委员会的批准。所有标本的使用均由病人或其委托人签署知情同意书。 2.肝癌组织蜡块制备并切片 将上述肝癌或正常组织切成1.5×1.5×0.3cm大小,用石蜡包埋后切成4μm厚的切片,并平铺在多聚赖氨酸包被的载玻片。 3.收集肝癌患者的临床病理资料 包括:门静脉癌栓、淋巴结转移、浆膜累及情况,肿瘤大小、数目,TNM分期,性别,年龄,确诊日期,死亡时间等。 4.采用免疫组织化学方法检测肝癌癌灶及正常组织中HLA-F表达情况。 5.统计分析 分析HLA-F表达与各临床病理因素以及患者预后的相关性。HLA-F表达与临床病理因素关系分析采用Pearson x2检验。术后生存率采用Kaplan-Meier法,生存曲线比较采用log-rank检验,运用Cox回归进行单因素及多因素生存分析。所有统计分析均采用SPSS13.0统计软件包进行,P<0.05为结果有统计学意义。 结果: 1.HLA-F染色产物呈棕色或棕褐色染,见于细胞膜或细胞质,胞核未见染色产物。 2.HLA-F在肝癌癌灶及邻近正常组织中的表达 HLA-F在肝癌癌灶组织及正常肝脏组织中表达阳性率分别为:47.0%(54/115),10.6%(7/66),两者差异有统计学意义(x2=24.799,P<0.05),癌灶组织HLA-F表达量高于正常组织。 3.HLA-F表达与临床病理因素的关系 癌灶区HLA-F的表达量与门静脉癌栓(x2=7.644,P=0.006)及患者性别(x2=6.759,P=0.009)具有相关性,而与患者年龄(x2=0.032,P=0.857)、肿瘤大小(x2=0.493,P=0.483)、肿瘤数目(x2=2.523,P=0.112)、浆膜侵犯(x2=0.001,P=0.970)、TNM分期(x2=0.007,P=0.932)等无明显相关。HLA-F表达更多见于门静脉癌栓阳性的患者。 4.HLA-F与肝癌患者预后的关系 1) Kaplan-Meier分析: HLA-F阳性患者预后较阴性患者差(x2=5.148,P=0.023),HLA-F阳性患者术后平均生存时间为34.0个月(95%CI,27.5-40.5月),HLA-F表达阴性HCC患者术后平均生存时间为44.6个月(95%CI,38.3-50.9月)。肝癌患者术后生存时间尚与TNM分期、门静脉癌栓有关,而与肿瘤数目、肿瘤大小、浆膜侵犯等无关。TNMⅠ/Ⅱ患者术后平均生存时间为43.7个月(95%CI,38.6-48.9月),TNMⅢ/Ⅳ期患者术后平均生存时间为28.4个月(95%CI,21.0-35.9月),TNMⅠ/Ⅱ期患者生存时间长于TNMⅢ/Ⅳ期患者(x2=8.771,P=0.003)。门静脉癌栓阳性患者术后平均生存时间为23.8个月(95%CI,13.8-33.8月),门静脉癌栓阴性患者术后平均生存时间为42.0个月(95%CI,37.1-46.8月),门静脉癌栓阴性患者生存时间长于门静脉癌栓阳性患者(x2=8.541,P=0.003)。 2) COX回归分析: 经单因素和多因素分析显示HLA-F表达(P=0.010)和TNM分期(P=0.002)均是影响肝癌患者术后生存的独立危险因素,RR值分别为:2.468(1.238-4.921),1.818(1.246-2.653)。而患者性别、年龄、肿瘤大小、浆膜侵犯、门静脉癌栓等均不是HCC患者预后影响因素。 结论: HLA-F可能参与了肝癌的发生,能够促进肝癌细胞的侵袭和转移; HLA-F表达是肝癌患者的独立预后影响因素,对肝癌患者预后判断有一定的参考价值;HLA-F有望成为肝癌的潜在诊断指标之—;HLA-F可表达于肝癌癌灶组织和正常组织,定位于细胞膜或细胞质。