本文主要从以下几个部分展开论述：　　第一部分 离体SHSY5Y细胞多梯度低温停循环模型的建立　　目的：　　离体条件下建立人神经母细胞瘤(SHSY5Y)细胞的多梯度低温停循环(HCA)模型，并探讨不同程度低温在缺血缺氧时的神经系统保护效果。　　方法：　　采用厌氧产气袋和密封细胞培养盒构建糖氧剥夺环境，糖氧剥夺体系与可控温的恒温培养箱构成离体多梯度HCA模型外观。将SHSY5Y细胞在不同温度中进行4h缺氧，并与正常培养细胞对比，糖氧剥夺结束后立即观察细胞缺氧形态，了解糖氧剥夺造成的即时损伤性形态改变，探讨低温对神经细胞的保护效果。进一步对糖氧剥夺后细胞给予复温和再灌注，微板法检测再灌注24h后细胞培养液中LDH水平，Western Blot检测再灌注24h后SHSY5Y细胞caspase-3凋亡蛋白的表达水平，了解细胞的凋亡情况，证实低温对细胞糖氧剥夺的保护作用，并简单比较不同程度低温间的差异。　　结果：　　糖氧剥夺使细胞缩小、聚集、胞体内出现大量暗性空泡，且糖氧剥夺时温度越高，形态改变越明显。LDH检测结果示，经糖氧剥夺的细胞，培养液中LDH漏出量显著增加，低温可减少LDH漏出。Western Blot结果显示，经糖氧剥夺的细胞Caspase-3蛋白表达水平明显上调，低温干预下调Caspase-3表达。　　结论：　　成功建立了离体多温度梯度HCA模型，有助于探索DHCA缺血缺氧的损伤及保护机制。低温可有效保护缺血缺氧的神经细胞，中低温和浅低温对离体状态下短时间缺血缺氧的神经细胞保护效果与深低温相近。　　第二部分 小泛素样修饰分子(SUMO)相关蛋白在不同温度糖氧剥夺的SHSY5Y细胞中的表达　　目的：　　探究不同程度低温与缺氧对SUMO化的影响，分析其变化规律和可能机制，并从SUMO化的角度探讨不同程度低温诱导脑缺血耐受的作用效果。　　方法：　　利用前期实验建立的多梯度HCA模型，在37℃、30℃、26℃、18℃条件下对SHSY5Y细胞进行糖氧剥夺(OGD)，Western Blot检测SUMO1、SUMO2/3、UBC9蛋白的表达情况和结合游离形态变化，实时荧光定量PCR(real time-qPCR)检测UBC9基因的表达水平，分析HCA过程中人神经细胞中SUMO相关蛋白的变化规律。　　结果：　　Western Blot结果显示，与37℃OGD组相比，低温干预可上调结合态SUMO1表达，温度越低表达量越高，18℃组明显高于30℃组(P＜0.05，n=6)，但18℃组与26℃组差异无统计学意义(P＞0.05，n=6);低温干预可同时上调结合态及游离态SUMO2/3表达(P＜0.05，n=6)，但与37℃OGD组相比，并不额外增加SUMO2/3蛋白结合游离比(P＞0.05，n=6);OGD和低温对UBC9蛋白表达影响均不显著(P＞0.05，n=6)。qPCR结果显示，OGD和低温对UBC9蛋白表达影响均不显著(P＞0.05，n=3)。　　结论：　　低温可通过增强SUMO1蛋白结合能力，增加SUMO2/3蛋白的表达，提高神经细胞抗缺血缺氧耐受能力。一定范围内，温度越低，通过SUMO途径诱导神经细胞缺血缺氧耐受效果越好，但中低温与深低温效果相近。　　第三部分 双荧光素酶报告基因检测miR-200c与UBC9蛋白表达的调控关系　　目的：　　探究人类细胞中miR-200c与UBC9蛋白表达的调控关系。　　方法：　　使用TargetScan在线工具分析UBC9 mRNA序列，预测其与miR-200c的调控关系和二者可能的结合位点。利用双荧光素酶报告质粒，确认miR-200c和UBC9蛋白表达的调控关系。　　结果：　　TargetScan在线工具检索结果显示人源miR-200c与UBC9 mRNA序列的匹配效率预测值98％，大概率具有调控关系。双荧光素酶报告实验结果显示，与对照组相比过表达组UBC9 3UTR下游的荧光素酶表达量显著减少(P＜0.05，n=3)，突变过表达组UBC9 3UTR下游的荧光素酶表达无显著变化(P＞0.05，n=3)。过表达组与突变过表达组UBC9 3UTR下游的荧光素酶表达量差异显著(P＜0.05，n=3)。　　结论：　　人类细胞中miR-200c与UBC9蛋白具有调控关系，下调miR-200c可减少UBC9蛋白的mRNA被降解。