染料木素在雌性小鼠和MDA-MB-231及SKOV-3细胞中的代谢分布

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染料木素作为一种天然界中存在的植物雌激素,它能够通过与动物体内的雌激素相关受体结合从而与雌二醇发生竞争关系,以此表现出类雌激素活性或抗雌激素活性。但是染料木素的有效作用剂量及其负面效果还不明确,存在争议。而以富含染料木素的大豆异黄酮产品越来越多的出现在市场上,并且染料木素也存在于各种食品中。为了进一步更好的评估染料木素在体内外所产生的效应,我们选择3周龄雌性小鼠和人乳腺癌细胞MDA-MB-231及人卵巢癌细胞SKOV-3为研究对象,考察染料木素在小鼠体内血浆和组织中的代谢分布情况以及在这两种癌细胞内外的分布情况。为染料木素及其部分代谢产物在体内外的分布提供一定的数据和参考依据,从而为更好的研究染料木素在体内外的效应提供一定参考。主要研究内容如下:1.考察了染料木素及其部分代谢产物在3周龄雌性小鼠体内的分布建立了LC-Q-TOF/MS检测血浆和组织中染料木素不同存在形式的方法。结果显示,在选定检测条件下,染料木素线性关系良好,日间、日内精密度良好,回收率较高,符合检测需要。采用SephadexLH-20来分离血浆和组织中染料木素水溶性和脂溶性代谢产物,具有良好的分离效果。以不同剂量的染料木素灌胃青春期雌性小鼠50天,经检测发现,染料木素水溶性代谢产物和脂溶性代谢产物在小鼠血浆和各组织中都有不同程度的累积,且具有剂量依赖性。高剂量组小鼠染料木素水溶性代谢产物含量范围在0.2754-15.3828μg/g;中剂量组小鼠水溶性代谢产物含量范围在0.2150-11.3717μg/g;低剂量组在小鼠水溶性代谢产物含量范围在0.1343-5.3609μg/g;其中肾上腺的分布量最高。高剂量组小鼠染料木素脂溶性代谢产物含量范围在0.0067-1.8175μg/g;中剂量组小鼠脂溶性代谢产物含量范围在0-0.9952μg/g;低剂量组小鼠脂溶性代谢产物含量范围在0-0.2562μg/g;其中高剂量组小鼠的脑组织分布量最高。在小鼠生殖器官乳腺、卵巢和子宫以及下丘脑中,这两种形式的染料木素含量都不低。2.研究了染料木素及其部分代谢产物在SKOV-3和MDA-MB-231细胞株内外的分布建立了LC-Q-TOF/MS检测细胞内外染料木素及其部分代谢产物的方法,结果显示,检测条件下,染料木素线性关系良好,日间、日内精密度良好,回收率较高,符合检测需要。以卵巢癌细胞(SKOV-3)和乳腺癌细胞(MDA-MB-231)为研究对象,加入染料木素作用不同时间后分析细胞内外染料木素不同存在形式分布情况,结果显示在MDA-MB-231和SKOV-3细胞内,染料木素主要以葡糖糖醛酸结合物形式存在,细胞外主要以染料木素原形物形式存在。但两株细胞对染料木素的吸收以及染料木素在细胞内外的分布情况不同。在MDA-MB-231细胞外,染料木素、染料木素硫酸结合物和染料木素葡萄糖醛酸结合物三种存在形式的含量范围分别为2.4714~13.8072μg/mL,1.1154~8.8809μg/mL,0.6615~14.4306μg/mL;细胞内三种存在形式的含量范围依次为0.1677~2.5164μg/mL,0.3456~8.2365μg/mL,6.8637~17.1669μg/mL。在SKOV-3细胞外,染料木素、染料木素硫酸结合物和染料木素葡萄糖醛酸结合物的含量范围分别为0.3699~2.4375μg/mL,0.3297~0.6048μg/mL,0.3201~2.0070μg/mL;细胞内三种存在形式的含量范围依次为0,0,0.9795~18.7929μg/mL。
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