目的:胃癌是我国发病率和死亡率均居前列的恶性肿瘤。由于胃癌早期没有特异的临床症状,加之我国胃镜筛查率较低,导致临床上早期胃癌的诊断率很低,绝大多数胃癌患者就诊时已经是进展期胃癌。对于进展期胃癌,Borrmann分型是目前世界上应用最广泛的大体分型方法。Borrmann分型共分5种,分别为隆起型(Borrmann 1型),限局溃疡型(Borrmann 2型),浸润溃疡型(Borrmann 3型),弥漫浸润型(Borrmann 4型),和不能归入上述4类的类型(Borrmann 5型)。五种类型的进展期胃癌中,Borrmann 4型胃癌被认为是最特殊的一类胃癌。Borrmann 4型胃癌的大体观具有如下特点:肿瘤向胃壁各层弥漫性浸润生长,表面没有明显的肿块隆起或者深溃疡形成,胃壁增厚变硬,粘膜皱襞粗大,胃腔变狭小,失去弹性,晚期状似皮革制成的囊,故称“革囊胃”。目前已有文献证实了Borrmann 4型胃癌具有不良预后的特点,但这些文献都不同程度的纳入了姑息手术或未接受手术的病例。多篇研究已证实手术根治度是Borrmann 4型胃癌的独立预后因素,Borrmann 4型胃癌如能根治性切除(R0切除),其预后将明显提高。因此,在R0切除病例中,Borrmann 4型胃癌的预后价值存在很大争议,尚需进一步探讨。国际抗癌联盟/美国癌症联合会颁布的TNM分期系统目前是胃癌最重要、最常用的分期系统。TNM分期系统包括T分期(肿瘤浸润深度),N分期(淋巴结转移数目),和M分期(是否远处转移)。目前有许多研究者认为,胃癌的T分期只考虑了肿瘤的浸润深度,其并不能充分反应原发肿瘤的全貌。据文献报道,如果胃癌T分期在肿瘤浸润深度的基础上结合其它的病理特点(如肿瘤大小、浆膜分型等),将明显提高T分期的预后价值。但是,Borrmann分型作为进展期胃癌最重要的病理特点之一,其是否可整合到T分期中并提高T分期的预后价值目前尚不明确。本研究的第一部分旨在探讨Borrmann 4型胃癌在R0切除的进展期胃癌病例中的预后意义,并尝试将Borrmann分型整合到胃癌的T分期中。临床上,Borrmann 4型胃癌常累及胃壁全层并蔓延至全胃,并伴有广泛的淋巴结转移及腹膜转移,即使接受了手术化疗等综合治疗,短期内亦会发生复发转移。随着胃癌诊治技术的不断进步,进展期胃癌的总体疗效和长期生存率逐年提高,但Borrmann 4型胃癌的治疗效果一直未得到有效改善。Borrmann 4型胃癌特殊的恶性生物学行为是其治疗效果不佳的主要原因。因此,寻找并深入研究Borrmann 4型胃癌恶性生物学行为的分子机制,对Borrmann 4型胃癌的疗效提高具有重要的意义。高通量筛选技术是发现肿瘤调控因子的有效方式。研究者们通过高通量筛选技术可以快捷高效地检测出差异表达基因,结合各种的基因分析软件和数据库,筛选出潜在的肿瘤调控因子,加以深入研究验证。目前肿瘤研究常用的高通量筛选工具为两种:基因芯片和高通量测序。高通量测序相对于传统的芯片杂交平台,具有定量更准确,检测通量更高,检测范围更广等优点。在本研究的第二部分和第三部分中,我们通过高通量转录组测序检测了Borrmann 4型胃癌细胞系OCUM-1和低分化胃癌细胞系AGS的差异表达基因,结合基因软件分析和网络数据库分析等手段筛选出肝脂肪酶C(lipase C hepatic type,LIPC)可能是Borrmann 4型胃癌的调控基因;接下来我们检测了LIPC在Borrmann 4型胃癌组织中的表达与并分析了其与临床病理特征及预后的关系;而后我们研究了LIPC对Borrmann 4型胃癌的恶性生物学行为的调控作用并探索了其中的分子机制。研究方法:本研究的第一部分:收集中国医科大学附属第一医院胃肠肿瘤外科1980年-2005年期间接受根治手术的进展期胃癌病例1622例,SPSS软件(19.0版本)用于统计分析。分类变量采用卡方检验分析,连续变量采用t检验分析。Logistic回归分析用于分析Borrmann 4型胃癌的独立预测因素。K-M生存曲线用于描绘总体生存(Overall survival),Log rank检验用于比较组间总体生存差异。Cox分层风险模型用于独立预后因素的分析。所有分析均为双边分析,P值<0.05为有统计学意义。本研究的第二部分和第三部分:采用Illumina HiSeq 4000系统高通量检测Borrmann 4型胃癌细胞系OCUM-1与非Borrmann 4型胃癌细胞系AGS之间的差异表达基因,GO分析软件及Pathway分析软件分析差异表达基因的基因功能。利用网络数据库KM plotter分析LIPC在胃癌中的预后意义。免疫组化检测LIPC在胃癌组织及癌旁正常组织的表达情况。构建靶向LIPC的shRNA慢病毒质粒感染至Borrmann 4型胃癌细胞系OCUM-1中,构建稳定低表达LIPC的OCUM-1细胞系。通过Transwell侵袭实验、Transwell迁移实验、CCK-8实验及流式细胞术检测细胞周期等技术检测敲减LIPC内源性表达后对OCUM-1的侵袭迁移、增殖、细胞周期等恶性生物学行为的影响。另外采用Western Blot技术检测敲减LIPC内源性表达后OCUM-1的EMT相关因子以及侵袭相关因子的表达变化情况。结果:1、临床病例分析显示,R0病例中,Borrmann 4型胃癌预后明显差于其它类型胃癌,多因素分析显示Borrmann 4型胃癌是独立的不良预后因素;进一步分析显示Borrmann 4型胃癌的预后与pT4b期胃癌预后一致。2、高通量测序结果显示,与AGS相比,OCUM-1共有2544个基因上调,2775个基因下调。差异基因表达GO分析及Pathway分析均提示差异表达基因中的部分基因和脂类代谢相关功能联系紧密,其中脂类代谢相关基因LIPC在OCUM-1中表达是AGS的44倍。网络数据库KM plotter分析显示LIPC阳性表达的胃癌患者生存明显差于LIPC阴性表达的患者。3、免疫组化结果显示LIPC在癌旁正常组织中几乎不表达,而在胃癌组织中阳性表达率明显升高,并且Borrmann 4型胃癌组织中的LIPC阳性表达率明显高于其它Borrmann类型胃癌组织。进一步分析发现LIPC阳性表达的Borrmann 4型胃癌病例淋巴结转移程度更重,TNM分期更晚,预后更差。多因素分析结果表明LIPC阳性表达是Borrmann 4型胃癌的独立不良预后因素。4、Transwell侵袭实验、Transwell迁移实验、CCK-8实验、流式细胞术检测细胞周期实验结果表明,敲减LIPC的内源性表达后,OCUM-1细胞的迁移能力及侵袭能力明显减弱,但增殖、细胞周期没有变化。5、Western Blot检测结果显示,敲减OCUM-1内源性LIPC表达可上调E-cadherin表达并下调Snail及MMP2表达。结论:1、Borrmann 4型胃癌是R0切除的进展期胃癌的独立不良预后因素,R0切除的Borrmann 4型胃癌应划归为pT4b期胃癌2、LIPC在Borrmann 4型胃癌组织中的表达与淋巴结转移、TNM分期及预后明显相关,LIPC阳性表达是Borrmann 4型胃癌的独立不良预后因素。3、LIPC可以调控Borrmann 4型胃癌细胞的迁移能力和侵袭能力,其调控作用可能是通过Snail/E-cadherin通路及Snail/MMP-2通路完成。