杉科ACGM标记的开发及应用研究

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利用日本柳杉的表达序列标签(Expressed Sequence Tags, ESTs)开发杉科(Taxodiaceae)的ACGM(Amplified Consensus Genetic Markers, ACGM)标记,然后选取部分PCR片段进行测序,以验证所开发标记对保守序列锚定的可靠性。然后,筛选有重要功能的基因片段,克隆基因长,为进一步研究奠定基础。主要结论如下:1.通过e-PCR,共得到了237对能获得单一条带的引物。随机选取其中的110对引物,在日本柳杉中进行扩增,其中有106对引物能得到稳定清晰的条带。然后利用这106对引物在其他10种杉科植物材料中进行PCR扩增。结果显示,在这10种不同杉科植物中,扩增出稳定清晰条带的引物数量范围为49-103个(46.2-97.2%),其中106对引物在柳杉中通用性最高达97.2%,在水杉中的通用性最低为46.2%,每个引物在这十种材料中平均扩增出的条带数为1.06-1.15条。这说明大部分的ACGM引物在这10种植物中能够获得单一的条带。2.选取开发的ACGM引物中4对引物的25个PCR产物进行测序。结果显示所得片段为所预测基因的上的片段。说明ACGM标记可以有效地锚定同源基因序列。3.在测序的PCR产物中选MYB和CHS基因的片段进行基因克隆,共克隆出12个基因全长,并对其结构与功能进行了分析。
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