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目的:动态观察活性维生素D3对肾间质纤维化过程中ILK、TGF-β1、E-钙粘素表达的影响,探讨活性维生素D3对UUO大鼠肾间质纤维化的影响及其机制。 方法:雄性清洁级SD大鼠96只,6周龄,体重180~220g,普通喂养,随机分4组:正常对照组24只,假手术组24只、单侧输尿管(UUO)梗阻大鼠模型组24只、活性维生素D3干预组24只,UUO模型是指行开腹手术后,游离左侧输尿管,在靠近左肾下极处结扎输尿管,UUO模型组、活性维生素D3干预组建立UUO动物模型;假手术组是指行开腹手术,仅游离左侧输尿管,不结扎;对照组不做特殊处理;干预组是在大鼠UUO模型建立后当天,将活性维生素D30.5ug溶于1ml花生油中灌胃,每天一次直至14天,正常对照组、模型组及假手术组给予每天1ml花生油灌胃。手术后第1天、3天、7天、14天天各处死6只大鼠,各组大鼠处死后均取左侧肾脏,肾组织分为两份,一份于10%甲醛溶液固定,一份于液氮中储藏。肾组织经HE以及Masson染色后在光镜下观察肾小管间质损害及肾间质纤维化并进行病理分级,计算积分平均数。免疫组化检测肾组织中ILK、TGF-β1、E-钙粘素的表达阳性细胞的面积及染色强度,计算各组平均积分值,并分析ILK、TGF-β1、E-钙粘素的表达与肾间质纤维化的相关性。RT-PCR方法在分子水平检测梗阻侧肾组织中ILKmRNA的表达水平。 结果:HE染色及Masson染色结果:与对照组、假手术组比较,模型组肾间质明显增宽,纤维化明显,炎细胞明显增多;与UUO模型组相比,维生素D3干预组肾间质增宽不明显,纤维化程度弱,炎细胞数量少,病理积分差异具有统计学意义(p<0.05),与对照组比较,假手术组炎细胞增多,病理损害加重,差异有统计学意义(p<0.05);免疫组化结果:与对照组相比,UUO模型组ILK阳性表达面积显著增加(P<0.01);TGF-β1表达增加(P<0.05),E-钙粘素表达减少(P<0.05),与UUO模型组比较,维生素D3干预组ILK表达减少(P<0.05),TGF-β1表达减少(P<0.05);E-钙粘素表达增加(P<0.05),ILK在肾小管间质中的表达增加,病理损伤程度与ILK呈正相关关系(r=0.960p<0.01);E-ca在小管间质中的表达逐渐减少,病理损伤程度与E-ca呈负相关关系(r=-0.833p<0.01);TGF-β1在小管间质中的表达逐渐增加,病理损伤程度与TGF-β呈正相关关系(r=0.806p<0.01)。RT-PCR结果:与对照组相比,UUO模型组ILKmRNA水平表达显著增加(P<0.01);与UUO模型组比较,维生素D3干预组ILKmRNA表达减少(P<0.05)。 结论:1)ILK参与了肾间质纤维化的的发生和发展;2)活性维生素D3可以抑制UUO大鼠肾间质ILK的表达,抑制TGF-β1的表达,增强E-钙粘素的表达;3)活性维生素D3可以通过抑制ILK的表达,延缓UUO大鼠肾间质纤维化,具有肾脏保护作用。