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研究背景：糖尿病(Diabetes.DT)是动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）的主要危险因素，其高血糖症导致的晚期糖基化终产物修饰的低密度脂蛋白（Advanced glycation end pruduct modified low density lipoprotein,AGE-LDL）在体内的沉积促进了AS的发生与发展。研究表明，肥大细胞活性与AS的形成和发展及斑块的稳定性相关。尽管未见相关报道，AGE-LDL对肥大细胞活性的影响可能是DT患者易患AS和易发急性心血管事件的重要病因。研究目的：本研究用AGE-LDL刺激小鼠骨髓来源肥大细胞（mouse bonemarrow derived mast cells，mBMMCs），观察其对肥大细胞释放组胺和分泌炎症介质活性的影响，并对相关信号通路进行初步探讨，同时研究了瑞舒伐他汀干预对AGE-LDL作用的影响，为糖尿病致AS和急性心血管事件提供新理论。研究方法：首先分离6-8周龄雄性C57BL/6小鼠骨髓细胞，以重组鼠白细胞介素-3（Recombinant murine Interleukin-3,rmIL-3）和重组鼠干细胞因子（Recombinant murine Stem cell factor，rmSCF）体外诱导骨髓细胞向肥大细胞分化，5周后经甲苯胺蓝染色和流式细胞仪检测进行细胞鉴定。接下来从两个方面研究AGE-LDL对肥大细胞活性的影响：（1）AGE-LDL对肥大细胞释放组胺的影响：给予不同浓度的AGE-LDL刺激，用OPT荧光法检测肥大细胞释放组胺水平；（2）AGE-LDL对肥大细胞释放炎症介质的影响：Real-timePCR检测不同浓度AGE-LDL作用6小时后肥大细胞肿瘤坏死因子α（Tumour necrotic factor-α,TNF-α）、白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）和γ干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）mRNA表达，酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测作用24小时后细胞培养上清中TNF-α、IL-6、IFN-γ的水平。最后对AGE-LDL影响肥大细胞活性可能的信号通路进行研究：(1）用AGE-LDL刺激肥大细胞，分别在0、0.25、0.5、1、2h时用Western印迹法分析核因子κB（Nuclear-κB,NF-κB）、p38MAPK、ERK1/2及JNK磷酸化情况。(2）分别给予NF-κB、p38、ERK1/2抑制剂PDTC、SB203580、PD98059和瑞舒伐他汀，再用AGE-LDL刺激肥大细胞，观察细胞释放组胺和分泌炎症介质的情况。(3)Western印迹法检测PDTC、SB203580和PD98059对AGE-LDL促NF-κB磷酸化作用的影响。研究结果：（1）RmIL-3和RmSCF在体外诱导小鼠骨髓细胞培养5周后，甲苯胺蓝染色显示超过95%的细胞被染成蓝紫色，流式细胞仪检测细胞表面分子CD117和FcεRIa表达双阳性率为95.6%，鉴定为成熟的肥大细胞。（2）AGE-LDL对肥大细胞活性的影响：AGE-LDL可刺激肥大细胞释放组胺，在10分钟作用最强，同时该作用呈浓度依赖性，与对照组和非糖化低密度脂蛋白（n-LDL）组相比差异均有统计学意义（p<0.05），在50ug/ml时达峰。不同浓度AGE-LDL刺激可显著上调肥大细胞炎症因子，诸如TNF-α、IL-6、IFN-γmRNA的表达，同时上清中相关因子的水平较对照组明显上调，以50ug/ml作用最强（p<0.05)。（3）AGE-LDL影响肥大细胞活性的信号通路研究：AGE-LDL能够促进p38MAPK、ERK1/2和NF-κB磷酸化，而对JNK磷酸化无影响；AGE-LDL作用15分钟时NF-κB磷酸化、P38MAPK磷酸化均达峰值，作用30分钟时ERK1/2磷酸化达峰值。瑞舒伐他汀能下调AGE-LDL作用下NF-κB、p38MAPK和ERK1/2磷酸化。P38MAPK、ERK1/2抑制剂SB203580、PD98059均能下调AGE-LDL作用下NF-κB的磷酸化。PDTC、瑞舒他汀能够抑制AGE-LDL对肥大细胞释放组胺的影响。NF-κB抑制剂PDTC、ERK1/2抑制剂PD98059和瑞舒伐他汀能抑制AGE-LDL对肥大细胞分泌炎症介质的作用。研究结论：AGE-LDL能够激活肥大细胞，促进其释放组胺和分泌炎症介质TNF-α、IL-6、IFN-γ，该作用与ERK1/2和NF-κB信号通路的激活相关。瑞舒伐他汀能够抑制AGE-LDL对肥大细胞的激活作用。AGE-LDL对肥大细胞活性的影响可能是糖尿病患者易患AS和易发急性心血管事件的重要病因。