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本论文利用生物测定、扫描电镜和生理生化等方法,观察了球孢白僵菌Bb04菌株的分生孢子在红火蚁工蚁虫体的附着部位、孢子侵染红火蚁的侵入时间、部位及行为,还测定了该菌株侵染过程中红火蚁体内蛋白质总含量、3种保护酶和2种酯酶的变化,初步明确了球孢白僵菌对红火蚁的入侵机制、致病过程中的生理生化机制。现将研究结果分述如下:
(1)球孢白僵菌的形态特征
分离自桔小实蝇的球孢白僵菌Bb04菌株的分生孢子呈球形,其产孢结构为瓶状结构,从菌丝上呈直角直接生成,产孢结构在菌丝上簇生成轮状,分生孢子以“之”字型方式生成。
(2)球孢白僵菌侵染红火蚁工蚁的侵入时间确定
利用生物测定法测定球孢白僵菌侵染红火蚁工蚁的侵入时间,在接种分生孢子每6h后用抑制剂将工蚁体表孢子杀灭,至48h止。试验表明,分生孢子在处理红火蚁工蚁后,12h-18h侵入。扫描电镜下看到节问膜处的分生孢子18h已经萌发侵入表皮。
(3)球孢白僵菌分生孢子对红火蚁工蚁的附着部位和侵染部位
在扫描电镜下可观察到分生孢子多分布在红火蚁工蚁胸腹部体侧的褶皱、节间膜及附近、气门内、刚毛稀少的凹陷部位,以及着生较密刚毛的足上和刚毛窝附近。并且附着在节间膜处的分生孢子在接种后18h就已经萌发,萌发的分生孢子从刚毛窝处及刚毛稀少的凹陷部位、胸部和足胫节处入侵。入侵的分生孢子可以直接以芽管侵入表皮,也可以产生附着胞再侵入。
(4)球孢白僵菌入侵对红火蚁各虫态体内蛋白含量的影响
球孢白僵菌入侵能显著降低各虫态红火蚁体内的蛋白含量。感染后红火蚁工蚁体内蛋白质总含量在接种后12h为46.37mg/g,与对照51.97mg/g相比没有显著差异,但随接种后时间的增加,处理组的蛋白含量不断降低,显著低于对照,到接种后72h下降至25.16 mg/g,而未感染的工蚁体内蛋白含量为51.42mg/g。感染球孢白僵菌的幼蚁组在接种后36h蛋白含量为24.13 mg/g,与对照的24.75mg/g相比,没有显著差异,随接种后时间的增加含量显著低于对照,到72h含量降至8.95mg/g。感染球孢白僵菌的蛹体内蛋白含量接菌后12h为36.57mg/g,与对照40.48mg/g相比没有差异,但处理组的蛋白质总含量在接菌后24h-72h均显著低于对照组。
(5)球孢白僵菌入侵后红火蚁体内3种保护酶活性的变化
红火蚁工蚁感染球孢白僵菌后体内的保护酶系统遭到破坏,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性都发生了不同程度的改变,感染后的红火蚁工蚁体内各时段超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性均显著低于与对照。而体内的过氧化物酶(POD)活力在接种后36h为12.33△0D/mg·pro/min,显著高于对照的10.13△0D/mg·pro/min,但在接种后12h、36h、48h、60h和72h的酶活力均显著低于对照。
(6)球孢白僵菌感染对红火蚁工蚁2种酯酶活性的影响
红火蚁工蚁感染球孢白僵菌后,工蚁体内的羧酸酯酶(CarE)在接种后24h开始下降,显著低于对照,在接种后36h,体内的羧酸酯酶活性达到最小值,为6.55mmol/mg·pro/min。但在接种后48h酶活性逐渐恢复,与对照没有显著差异,接种后72h酶活力上升到8.14mmol/mg·pro/min,而对照为8.02mmol/mg·pro/min。经球孢白僵菌处理的红火蚁工蚁的乙酰胆碱酯酶(AchE)比活力在接种后12h和24h分别为6.79 nmol/mg·pro/min和6.4l nmol/mg·pro/min,与相同时间的对照7.76nmol/mg·pro/min和6.23 nmol/mg·pro/min相比,没有显著差异;处理组在显著36 h乙酰胆碱酯酶(AchE)比活力为9.24nmol/mg·pro/min显著高于对照6.65nmol/mg·pro/min;到在60h和72h,处理组的乙酰胆碱酯酶(AchE)活性又显著低于对照组。说明红火蚁工蚁在感染球孢白僵菌后,对体内的羧酸酯酶是先抑制再激活,恢复到正常水平;而对乙酰胆碱酯酶活性是先激活再抑制,最终导致红火蚁死亡。