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[目 的]骨形成与骨吸收失衡是骨质疏松等骨代谢障碍疾病的发病基础,积极寻找促进骨形成的药物对于治疗骨质疏松至关重要。已有多项体内外研究证实,白藜芦醇可促进成骨活动,但其安全性及作用机制尚未阐明,限制了其临床使用。近期有研究发现,GATA转录因子家族作为调节巨核细胞和红细胞分化过程的重要转录因子,或许可以直接或间接地影响骨代谢,但其具体作用机制尚不清楚。因此,本研究以GATA-1为切入点,在观察白藜芦醇对成骨前体细胞MC3T3-E1增殖促进能力的同时,观察研究GATA-1是否参与增殖过程的调控,以及其二者之间的作用与联系。[方 法]体外培养成骨前体细胞MC3T3-E1,运用CCK-8检测细胞活力、结晶紫检测集落形成、Western-blotting检测细胞周期蛋白Cyclin-D1表达,确定白藜芦醇对MC3T3-E1的增殖促进作用及有效浓度。通过Western-blotting检测LC3II与ATG7的表达水平、利用自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)标记自噬小体与溶酶体,观察白藜芦醇促增殖过程中自噬水平的改变。使用自噬抑制剂3-MA与自噬流阻断剂巴弗洛霉素,观察自噬水平降低后增殖的改变,以及加入白藜芦醇是否可以改变抑制剂的效果。Western-blotting检测GATA-1及AMPKα表达水平、免疫荧光标记GATA-1位置,观察白藜芦醇及AMPKα激动剂AICAR是否影响GATA-1的表达变化及核转位。构建小干扰RNA干扰MC3T3-E1中GATA-1的表达,观察其对自噬及增殖的影响,以及加入白藜芦醇是否可以改变这一影响。[结 果]1.0.1-10 μM白藜芦醇是对于体外培养的成骨前体细胞MC3T3-E1株是安全的应用范围;其中,1 μM白藜芦醇可以显著促进成骨前体细胞株MC3T3-E1增殖(p<0.005),而10μM白藜芦醇作用24 h可以上调细胞周期蛋白 Cyclin D1 的表达(p<0.01)。2.10 μM白藜芦醇作用24 h可以同时上调LC3II及ATG7的表达水平(p<0.01),并促进自噬小体及自噬溶酶体形成。而使用自噬抑制剂可以下调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达,但加用白藜芦醇可以改善对增殖的影响;12h内使用血清饥饿诱导自噬可以增加细胞周期蛋白Cyclin D1的表达量。3.10 μM白藜芦醇作用12 h可增加GATA-1的表达量,促进其核转位。使用siRNA干扰GATA-1的表达后,LC3II与细胞周期蛋白Cyclin D1的表达均下降。说明GATA-1在促进成骨前体细胞MC3T3-E1增殖、诱导其自噬中起重要作用。4.10μM白藜芦醇作用12 h可促进AMPKα磷酸化。单独使用AMPKα的激动剂AICAR也可上调GATA-1的表达并促进其核转位,但效果不如白藜芦醇,说明AMPKα可能是GATA-1的上游调控因子之一。[结 论]这些结果表明,白藜芦醇通过GATA-1激活自噬,从而诱导成骨前体细胞MC3T3-E1增殖,而AMPKα是GATA-1上游调控因子之一。