枸杞多糖对阿弗他溃疡免疫功能调节的实验研究

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目的:1、通过免疫注射法诱导建立复发性阿弗他溃疡(recurrent aphthous ulcer, RAU)SD大鼠模型,为进一步明确人RAU的发病机制及预防治疗提供实验理论基础。2、探讨枸杞多糖(Lycium bararum polysaccharide, LBP)对实验性复发性阿弗他溃疡SD大鼠免疫调节功能的影响。方法:1、80只大鼠,随机分成两组:正常对照组(16只)与实验组(40只),余24只处死后提取口腔黏膜制备抗原。2、将口腔黏膜与完全弗氏佐剂等积混合震荡成乳化液,于实验组大鼠脊柱两侧皮内注射,每侧各注射0.1ml,每周一次,连续注射8周。正常对照组只注射0.1ml生理盐水。3、8周后,两组大鼠各随机处死8只制作病理组织切片,观察两组大鼠口腔黏膜变化情况。4、免疫组化染色观察两组大鼠口腔黏膜中表皮生长因子(EGFR)的表达情况。5、ELASA法检测建模前后两组大鼠血清中EGFR的水平。6、流式细胞术检测两组大鼠建模后外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+T细胞数量及CD4+/CD8+比值。7、40只大鼠分为:A、B、C、D、E 5组,A组为正常对照组,B组为阴性对照组(生理盐水组)、C-E组分别为LBP低、中、高浓度治疗组:100mg/kg、200mg/kg、300mg/kg,每组8只。8、灌药后20天,病理组织切片观察灌药后各组大鼠RAU变化。9、灌药后20天,利用ELASA法检测灌药后各组大鼠血清中EGFR的水平。10、灌药后20天,利用流式细胞术检测各组大鼠外周血T淋巴细胞亚群细胞数量及比值。11、灌药后第2天,检测LBP对各组大鼠胸腺质量、胸腺指数的影响。结果:1、建模前后两组大鼠血清内EGFR为(ng/L):实验组:833.79±7.41,837.43±4.58,差异无统计学意义(P>0.05),对照组843.54±3.87,282.69±7.91差异具有统计学意义(P<0.05)。建模后对照组与实验组相比,EGFR水平降低(P<0.05)。2、免疫组化分析显示:EGFR在正常口腔黏膜和RAU中均有表达,在对照组和RAU黏膜中阳性率分别为30.7±10.1,9.6±6.2,两者之间差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。3、建模后,正常对照组与实验组大鼠中CD4+、CD8+T细胞数量及CD4+/CD8+比值分别为:对照组为49.91±3.27,18.72±2.45,2.45±0.32,实验组:30.27±3.53,29.76±4.02,1.01±0.78。与正常对照组相比,实验组CD4+T细胞数量、CD4+/CD8+比值显著降低,而CD8+T细胞数量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。4、灌药后20d,5组大鼠血清内EGFR的表达水平变化分别为(ng/L):正常对照组(A):824.61±4.36,阴性对照组(B):303.25±7.81, LBP (100mg/kg)组(C):492.31±3.24, LBP(200mg/kg)组(D):632.47±4.84, LBP(300mg/kg)组(E):804.26±4.60。阴性对照组(B)大鼠血清内EGFR的表达水平较正常对照组(A)降低(P<0.05),而LBP各治疗组大鼠血清内EGFR的表达水平依次升高,与阴性对照组(B)差异显著(P<0.05),且高浓度组(300mg/kg) LBP (E)的EGFR升高水平均较LBP(100mg/kg)组(C)及LBP (200mg/kg)组(D) LBP较高。5、灌药20d后,与正常对照组相比,阴性对照组CD4+、CD4+/CD8+下降,CD8+升高,差异具有统计学意义(F<0.05)。LBP各治疗组与阴性对照组相比,CD4+、CD4+/CD8+回升,CD8+降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。6、阴性对照组(B)大鼠的胸腺质量(rmg)为314.6±78.2,胸腺指数(mg/g)为73.3±16.9,低于正常对照组422.6±123.1,94.2±25.4 (P<0.05)。而LBP治疗组该指数与阴性对照组相比均有升高,具有显著性差异(P<0.05)。结论:1、利用正常SD大鼠口腔黏膜作为抗原,可诱导SD大鼠发生RAU,其临床表现及组织学检查均与人类RAU相似,表明此动物模型对研究人RAU的具有-定的实验指导意义。2、EGFR在正常口腔黏膜与RAU均有表达,并且在RAU大鼠中表达降低,此原因可能与RAU的发生有密切关系。3、大鼠外周血清中CD4+T淋巴细胞水平及CD4+/CD8+低于正常时可导致机体免疫力降低,而形成口腔溃疡。4、LBP能够提高RAU大鼠外周血内CD4+T细胞数量及CD4+/CD8+的比值,该作用的发挥与其调节免疫功能有关。5、LBP可通过增加胸腺质量与胸腺指数,增强机体免疫活性。
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