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复方紫金肝泰是由紫红獐牙菜(Swertia punicea Hemsl)和鸡内金组方研究而成的中药新药,以紫红獐牙菜为君药。为了阐明复方紫金肝泰治疗乙型肝炎的物质基础,本课题从体外抗乙型肝炎病毒(HBV)活性方面对紫红獐牙菜的有效部位、活性成分和鸡内金的有效酶解产物进行了较系统的研究,并建立了紫红獐牙菜及其近缘种中多种活性成分含量测定的方法以及紫红獐牙菜药材的指纹图谱。 将紫红獐牙菜乙醇提取物(SP)分散于水中,用石油醚、乙醚、乙酸乙酯分别萃取,得到石油醚提取物(F1-SP)、乙醚提取物(F2-SP)、乙酸乙酯提取物(F3-SP)和水溶性部位(F4-SP),再用AB-8型大孔吸附树脂富集水溶性部位中的苷类等成分,得纯化后的水溶性部位(F4′-SP)。用乙型肝炎病毒(HBV)DNA转染人肝癌细胞(HepG2)的2215细胞系筛选有效部位,以观察细胞病变(CPE)为指标测定药物毒性,用固相放射免疫法(RIA法)测定2215细胞分泌的HBsAg、HBeAg。其中水溶性部位(F4-SP、F4′-SP)毒性较小,两者TC50均大于2000μg/ml;乙酸乙酯提取物(F3-SP)为体外抗HBV的有效部位,其对HBsAg、HBeAg的半数毒性浓度(IC50)分别为58μg/ml、100μg/ml,选择指数(SI)分别为12.2、7.1,并且多数浓度组对HBsAg、HBeAg抑制率与细胞对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。从而筛选出紫红獐牙菜抗HBV的有效部位。 从F4′-SP进一步分离得到4个单体化合物,经理化性质和UV、IR、1HNMR、13CNMR、HMQC、HMBC及MS等波谱数据分析,分别鉴定为芒果苷(mangiferin,1,3,6,7-四羟基口山酮-2-C-β-吡喃葡萄糖苷,Ⅰ)、獐牙菜苦苷(swertiamarin,Ⅱ)、当药醇苷(swertianolin,8-0-β-D-吡喃葡萄糖-1,5-二羟基-3-甲氧基(?)酮,Ⅲ)及葡萄糖(glucose,Ⅳ)。从F3-SP进一步分离得到5个单体化合物,分别鉴定为1,7,8-三羟基-3-甲氧基(?)酮(swertianin,Ⅴ)、1,7-二羟基-3,8-2-甲氧基(?)酮(Ⅵ)、1,5,8-三羟基-3-甲氧基(?)酮(bellidifolin,Ⅶ)、5-0-β-D-吡喃葡萄糖-1,8-二羟基-3-甲氧基(?)酮(Ⅷ)及齐墩果酸(oleanolic acid,Ⅸ),其中化合物Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ为首次从紫红獐牙菜植物中得到。化合物Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅸ对培养8d的2215细胞的HBsAg表达有抑制作用,IC50如分别为432μg/ml、30μg/ml、13μg/ml、12.4μg/ml,SI分别为1.16、2.1、6.8、14.2;化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅷ对2215细胞的HBeAg表达有抑制作用,IC50 分别为88.5μg/ml、8.0μg/ml、8.72μg/ml、18.67μg/ml,SI分别为4.5、6.2、2.36、6.76。以上化合物对2215细胞DNA均无明显的抑制作用。从而确定了紫红獐牙菜抗