朵丽蝶兰(Doritaenopsis)为蝴蝶兰属(Phalaenopsis)与朵丽兰属(Doritis)杂交属统称,与传统的蝴蝶兰相比,具有较高的观赏价值和经济价值。本研究以朵丽蝶兰(Doritaenopsis‘Tinny Tender’)为试材,克隆了DhCOL的cDNA ORF区全长,并对其构建植物表达载体,拟通过转基因技术和比较16h/8h(昼/夜)和8h/16h(昼/夜)不同光周期处理下DhCOL和DhGI1的相对表达对其进行了功能验证。研究结果如下:　　1、DhCOL基因全长为834bp,编码的蛋白质为核定位不稳定蛋白,由277个氨基酸组成,分子量为29352.7,理论等电点为5.34,含有两个锌指-B-box结构域和一个CCT结构域,聚类分析表明该基因与蝴蝶兰杂交种的PhalCOL,文心兰的 OnCOL,石斛的 DlCOL,建兰的 CeCOL有着高度的同源性,分别为:98％,84%,83%,80%;　　2、荧光定量结果显示:DhCOL在长日照下,几乎以8h为周期节律性表达,在短日下均在光暗转换过渡时期有一个表达高峰;DhGI1无论在长日还是短日下均在在光期7h时,表达量较高,在暗期转向光期时表达量最低,且其表达量均高于 DhCOL。在各生长阶段,DhCOL和 DhGI1在长日照下的表达均较高,且均在花梗抽出小于4cm时表达较高;在短日照下DhGI1花梗抽出7cm-10cm时表达量最高。DhGI1和DhCOL均在较大的花苞中表达量较高,且在长日照下比在短日照下表达量高。各组织中DhCOL在长日照下的表达量均比短日照高,且DhCOL和DhGI1均在茎中的表达量最高;DhGI1在短日照下在茎和花中的表达高于长日照,但在其他组织中的表达均低于长日照。在花部各器官中DhCOL和DhGI1在长日照下均在唇瓣中表达量较高,在短日照下均在花粉块中表达量较高。　　3、以pCAMBIA1301为植物表达载体,构建的PC1301-DhCOL正向表达载体经酶切和测序验证正确;采用蘸花法浸染拟南芥,并利用潮霉素筛选出了纯合子,且检测了其在基因组水平和转录水平上目的基因的表达,表型显示:DhCO L的过量表达延迟了拟南芥的抽薹时间,且在整个生长阶段并未开花和结果,推测DhCOL可能参与了朵丽蝶兰的成花网络途径。