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第一部分:结直肠癌肠道菌群分析与肿瘤组织PD-L1表达的相关性目的:分析结直肠癌患者与健康人群的肠道菌群差异及肠道菌群与肿瘤组织PD-L1表达的相关性。材料和方法:纳入广西医科大学第一附属医院结直肠肛门外科2018年11月至2019年10月收治的结直肠癌患者40例为CRC组。选择其健康配偶为Health组。于术前采集患者及配偶粪便进行肠道菌群宏基因组测序。随后通过免疫组化实验检测肿瘤组织PD-L1表达,并根据PD-L1表达的阳性、阴性进行分组对比肠道菌群的差异。结果:1.CRC组菌种数丰度较Health组高,且差异菌种分类水平集均在属水平,两组Top20菌种构成有明显差异。2.肠道菌群在肿瘤组织PD-L1表达阳性组与阴性组中存在明显差异。结论:CRC患者肠道菌群较健康人群丰度增高,肿瘤组织PD-L1表达不同肠道菌群存在明显差异。第二部分:结直肠癌肠道菌群移植对小鼠免疫环境的影响目的:研究结直肠癌肠道菌群移植对小鼠免疫环境的影响。材料与方法:1.术前取第一部分入组CRC患者及健康配偶粪便提取肠道菌群;2.将C57BL/6J小鼠80只分为4组,每组20只,皮下种瘤裸鼠60只分为4组每组15只,依次移植入PD-L1阳性CRC肠道菌群、PD-L1阴性CRC肠道菌群、健康配偶肠道菌群、无菌生理盐水。3.记录小鼠的体重增长、生存时间及皮下肿瘤生长情况;肠道菌群移植结束取小鼠动脉血、脾脏、皮下肿瘤组织、大肠组织进行检测。4.以流式细胞术检测C57BL/6J小鼠血液CD4+/CD8+T细胞表达;以Elisa检测C57BL/6J小鼠血清PD-L1、IL-6、IFN-γ表达情况及D-LDH浓度;以Real-time PCR测定裸鼠皮下肿瘤组织IL-6、IFN-γ、PD-L1 m RNA表达差异;以Western Blot测定C57BL/6J小鼠与裸鼠大肠组织occludin蛋白表达;显微镜下进行大肠黏膜病理评分。结果:1.肠道菌群移植对小鼠体重的影响:C57BL/6J小鼠各组移植过程中体重呈上升趋势,其中肠癌菌组与健康菌组均低于空白组,肠癌菌组低于健康组,PD-L1阴性癌菌组低于PD-L1阳性癌菌组（P＜0.05）;裸鼠各组自移植第2周体重迅速下降,其中肠癌菌组与健康菌组均低于空白组,肠癌菌组低于健康组,PD-L1阳性癌菌组与PD-L1阴性癌菌组无明显差异（P＞0.05）。2.肠道菌群移植对小鼠生存期的影响:C57BL/6J小鼠与裸鼠生存期呈相同规律,其中肠癌菌组与健康菌组均短于空白组,肠癌菌组短于健康菌组,PD-L1阳性癌菌组短于PD-L1阴性癌菌组（P＜0.05）。3.肠道菌群移植对裸鼠皮下肿瘤生长的影响:裸鼠皮下肿瘤体积在肠癌菌组大于健康菌组与空白组,PD-L1阳性癌菌组大于PD-L1阴性癌菌组（P＜0.05）,健康菌组与空白组无明显差异（P＞0.05）。4.肠道菌群移植对小鼠免疫环境的影响:（1）C57BL/6J小鼠脾脏CD4+/CD8+T细胞表达在肠癌菌组与健康菌组均低于空白组,肠癌菌组低于健康菌组,PD-L1阳性癌菌组低于PD-L1阴性癌菌组（P＜0.05）;（2）C57BL/6J小鼠血清IL-6含量在肠癌菌组与健康菌组均高于空白组,肠癌菌组高于健康菌组,PD-L1阳性癌菌组高于PD-L1阴性癌菌组（P＜0.05）;C57BL/6J小鼠血清IFN-γ含量在肠癌菌组高于健康菌组与空白组（P＜0.05）,PD-L1阳性癌菌组与PD-L1阴性癌菌组无明显差异;空白组与健康菌组无明显差异（P＞0.05）;（3）C57BL/6J小鼠与裸鼠血清PD-L1含量在肠癌菌组与健康菌组均高于空白组,肠癌菌组高于健康菌组,PD-L1阳性癌菌组高于PD-L1阴性癌菌组（P＜0.05）;（4）裸鼠皮下肿瘤组织PD-L1 m RNA表达在PD-L1阳性癌菌组高于健康菌组,PD-L1阴性癌菌组低于健康菌组（P＜0.05）;（5）裸鼠皮下肿瘤组织IL-6 m RNA表达在肠癌菌组高于健康菌组（P＜0.05）,PD-L1阳性癌菌组与PD-L1阴性癌菌组无明显差异（P＞0.05）;裸鼠皮下肿瘤组织IFN-γm RNA表达在肠癌菌组高于健康菌组,PD-L1阳性癌菌组高于PD-L1阴性癌菌组（P＜0.05）。5.肠道菌群移植对小鼠大肠黏膜的影响:（1）C57BL/6J鼠与裸鼠血清D-LDH浓度在肠癌菌组与健康菌组均高于空白组,肠癌菌组高于健康菌组（P＜0.05）,PD-L1阳性癌菌组与PD-L1阴性癌菌组无明显差异（P＞0.05）;（2）大肠occludin蛋白在肠癌菌组明显低于健康菌组与空白组（P＜0.05）,PD-L1阳性癌菌组略低于PD-L1阴性癌菌组,健康菌组略低于空白组,差异尚无统计学意义（P＞0.05）;（3）大肠粘膜病理评分肠癌菌组高于健康菌组与空白组（P＜0.05）,PD-L1阳性癌菌组与PD-L1阴性癌菌组无明显差异;健康菌组与空白组无明显差异（P＞0.05）。结论:1.CRC肠道菌群移植可降低小鼠体重与生存期,PD-L阳性肠癌菌作用更显著。2.CRC肠道菌群移植可促进裸鼠皮下肿瘤生长,PD-L阳性肠癌菌作用更显著。3.CRC肠道菌群移植可下调小鼠CD4+/CD8+T细胞,上调小鼠血清与肿瘤微环境PD-L1、IL-6、IFN-γ表达,PD-L阳性肠癌菌作用更显著。4.CRC肠道菌群移植导致小鼠大肠黏膜通透性增高、损伤加重。